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实验一琼脂糖凝胶电泳对DNA提取实验目的学习使用水平式琼脂糖凝胶电泳进行DNA的提取实验原理琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应根据DNA分子量不同,采用外加电场使其分开,用生物染料嵌入DNA分子后在紫外下显色1)在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下,带负电的核酸分子向正极迁移由于糖——磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极方向移动2)在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA分子本身的大小和构型具有不同的相对分子质量和不同构型的DNA片段泳动速度不一样,可进行分离3)生物染料在紫外光照射下能发射荧光,当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动时,生物染料从正极向负极移动,就会嵌入DNA分子中形成络合物,使DNA在紫外光下发射很强的荧光在生物染料足够的情况下,荧光的强度正比于DNA的含量,这样就可以检测DNA的浓度实验材料微量移液器2μl和4μl,高压灭菌锅,电泳仪,琼脂糖平板电泳装置,微波炉等TAE电泳缓冲液,琼脂糖凝胶,PCR扩增样品实验步骤1胶液的制备称取
0.2g琼脂糖置于200ml锥形瓶中加入20mlTAE稀释缓冲液,放入微波炉里加热至琼脂糖全部熔化,沸腾取出摇匀加热时应盖上封口膜以减少水份蒸发2胶板的制备将有机玻璃胶槽两端分别用透明胶带宽约1cm紧密封住将封好的胶槽置于水平支持物上插上样品梳子3向冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中小心地倒入胶槽内使胶液形成均匀的胶层检查有无气泡4室温下约20分钟后,琼脂糖溶液完全凝固,小心垂直拔出梳子和挡板,注意不要损伤梳底部的凝胶,清除碎胶将凝胶放入电泳槽中5加入电泳缓冲液(TAE)至电泳槽中,使液面高于胶面约1mm6加样取2μlPCR样品与2μl缓冲液液混匀用微量移液枪小心加入样品槽中小心操作避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿7电泳加完样后,插上导线,打开电泳仪电源,按照需要调节电压至160V,电泳开始,观察电流情况或电泳槽中负极的铂金丝是否有气泡出现8当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约1cm时,...。