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很好,需要好好研究一下原文地址毕赤酵母表达知识01转载于丁香http://blog.sina.com.cn/s/blog_539ca97e0100qm2z.html\o毕赤酵母表达知识01转载于丁香\t_blank作者思时尔非http://blog.sina.com.cn/u/1402775934\o思时尔非\t_blanka.配制500×BIOTINstocksolution(
0.02%)有这么3种方案
1、懒人是将Biotin直接溶在去离子水中,放过夜,基本就能溶;
2、急性子是将溶液配成
0.02N的NaOH,就很容易溶解了;
3、水浴加热,温度不能高于50度D-生物素是具有生物活性的生物素,也就是vitaminH在毕赤酵母代谢过程中,作为多种酶的辅基起作用天然培养基中一般可以不单独添加,因为YNB中、酵母粉、蛋白胨中均含有一定量的生物素,但是做高密度发酵还是必须要添加的b.有几个比较迷惑的问题请教大家很典型的小问题)
1、制感受态细胞,OD多少比较好?pyrimidine战友的方法取1mlGS115过夜培养物OD约6-10分装到
1.5mlEP管中说明书还有一些文献是说在
1.3左右效率高,再高了效率会很低
2、关于高效转化法,文献说用LiAc,而invitrogen的说明书说转化毕赤酵母用LiAc没用,要用LiClLithiumacetatedoesnotworkwithPichiapastoris.Useonlylithiumchloride.
3、YNB到底能高温灭么?有的说能有的说不能过滤灭菌的怎么操作?我是把滤器装好膜绑到瓶口用纱布盖上,报纸包上,瓶盖放烧杯里单灭然后把配好的溶液用注射器一点点推进去
4、葡萄糖为什么在YPD里一起灭颜色很深,单灭则不会该115度还是121度灭?网上搜了下,都有人用!
5、电转化参数用400欧还是200欧?有的用400,有的还专门说不是用400都是从园里看到的!电击参数
1.5KV,25uF,200欧姆(不是400)
6、电转后,在MD平板上长的应该就是整合了目的基因的重组子了吧?如果不想...。