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文本内容:
绿色荧光蛋白基因在大肠杆菌中的表达与检测
1、背景介绍1.绿色荧光蛋白1955年,Davenport和Nicol在太平洋海里的一种发光生物—维多利亚水母Aequoreavictoria中发现并发表了荧光蛋白的生物发光现象,但是对生物发光现象的机理并不了解1962年,日本科学家下村修在水母中纯化鉴定出了一种能催化化学发光的蛋白质分子并将其命名为aequorin,aequorin能将化学能转化为光能,从而产生出波长为470nm的蓝色光lmax=470nm,但是水母发出的光是独有的绿色,因此水母发光的蛋白质并非aequorin与此同时,发现和分离了一个受紫外线激发能发出绿色荧光的蛋白质—绿色荧光蛋白GFP1971年,Morin和Hastings提出了GFP这个名称1985到1992年间,科学家DouglasPrasher测定完成了aequorin和GFP的基因和蛋白质序列,并通过蛋白质序列分析和核磁共振分光术NMRspectroscopy确定了GFP发光位点1994年,美国科学家钱永健开始改造GFP,目前所用的大多数是钱永健实验室改造后的变种,有的荧光更强,有的可激活、变色1996年,解析得到了GFP的晶体结构,它的发光过程是也在日后的应用中得到了解答纵观整个过程,从1961年到1974年,下村修的研究遥遥领先,却很少有人注意在1974年以后,特别是八十年代后,绿色荧光蛋白的研究得到了广泛的重视和发展绿色荧光蛋白,分子质量约为28kDa,由238个氨基酸构成,第65~67位氨基酸Ser-Tyr-Gly形成发光团,经共价键连接而成对羟苯甲基咪唑烷酮,它可以被光激发产生荧光,是主要发光的位置绿色荧光蛋白分子的形状呈圆柱形,就像一个桶,发光的基团位于桶中央,因此,它可形象地比喻成一个装有色素的“油漆桶”其发光团的形成不具有物种专一性,发出的荧光稳定,且不需要依赖其他基质而发光GFP的优点很多首先,它本身稳定,不需要任何反应底物和辅助因子,且无种属限制,可在多种生物细胞中表达发出稳定荧光,在450~490nm蓝光激发下发光能保持10min以上其次,其分子量小,对目的基因的功能无任何影响,融合蛋白具有与GFP一样的荧光性质,对细胞没有毒性最后,GFP观察方便,利用激光扫描共聚焦显微镜,甚至...。