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DNA胶回收实验技术总结一.提高胶回收量的办法1增加电泳时的上样量2电泳缓冲液用新鲜配制的3切胶时尽量只切有条带的胶,减小切胶体积含目的片断很少的胶就不要要了,不然影响回收率4把切的两块或多块胶融化后,无论多大的体积都用一个管子,转移到同一个柱子上5溶胶时所加的溶液可多一点,这样更有利于DNA与膜的结合,不过一般不要多余750ul6胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性(电荷)和疏水性使DNA与柱子结合,因此,若电泳缓冲液的PH偏高,可在溶胶液中加入10ul(PH
5.0,3mol/L的NaAC);为了使DNA分子更好的拦截在膜上,可以添加30%异丙醇在加热溶解胶后的液体里7加洗脱液之前,将柱子在室温放置几分钟(大约需10分钟),以使乙醇充分挥发8最后少加些洗脱液,尽量减少回收体积,一般用30-50μl洗脱液洗脱(不能太少,否则无法浸湿膜反而不利于洗脱);洗脱液滴在膜中央,以充分洗脱结合在膜上的DNA9可以在加入洗脱液之后,可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱,或用封口膜密封4度过夜,第二天再离心回收,效果不错10将离心后的洗脱液加回吸附柱,再次离心二.几种PCR产物回收的详方法和步骤1普通胶回收如果要胶回收,最好还是用试剂盒,方便,回收率也略高,实在要手工回收,可以切胶后加入3倍体积TE,水浴熔化后,酚、酚/氯仿抽提干净,乙醇沉淀即可另外好像还有冷冻法,没作过,不是很清楚2从低熔点凝胶回收DNA纯化DNA片段加与凝胶体积相等的TE(10mmol/lTris-HClpH
8.0,
0.1mmol/lEDTA),置65℃水浴5分钟保温,使凝胶完全溶解待放至室温,加等量酚(TE饱和,TE封在上层,取下层酚),轻轻混匀(不用混匀),12000rpm,3分钟离心反复1-2次取上层液,加
0.1体积3mol/L醋酸钠(pH
5.2)和
2.5倍体积无水乙醇,进行乙醇沉淀将纯化的DNA加适量TE溶解,测定含量,备用(可用于目的基因结构分析,探针制备等)3扩增特异性好的PCR回收如果PCR扩增特异性好,只是简单的PCR产物纯化回收,可以在PCR产物中加入50ug/ml的蛋白酶K,37度
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