基质金属蛋白酶7和组织型金属蛋白酶抑制因子1在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

基质金属蛋白酶-7和__型金属蛋白酶抑制因子-1在膀胱移行细胞癌中的表达及意义__李文林，段建敏，马光旭，许崇伟，丁瑞志【摘要】目的探讨基质金属蛋白酶-7（___-7）和金属蛋白酶__抑制因子-1（TIMP-1）在膀胱移行细胞癌中的表达及意义方法应用免疫__化学技术检测60例膀胱移行细胞癌［Ⅰ级25例，Ⅱ级15例，Ⅲ级20例；浅表性膀胱癌（Tis～T1）29例，浸润性（T2～T4）31例］和5例正常膀胱__中___-7和TIMP-1的表达情况，χ2检验分析其表达与膀胱移行细胞癌分级分期的关系结果___-7和TIMP-1在正常膀胱__中不表达，而在膀胱移行细胞癌__表达较强60例膀胱移行细胞癌标本中___-7阳性表达40例（

66.7%）___-7的阳性表达率与肿瘤的病理分级显著相关，而与肿瘤的临床分期无明显相关性60例膀胱移行细胞癌标本中TIMP-1阳性表达32例（

53.3%）TIMP-1在不同的__分化程度，不同临床分期之间均差异无统计学意义（P＞

0.05）而___-7/TIMP-1表达比值与肿瘤的病理分级显著相关结论___-7及___-7/TIMP-1比值可反映膀胱移行细胞癌的恶性程度，为膀胱移行细胞癌的预后判断提供一种新的参考指标【关键词】膀胱肿瘤；癌；金属蛋白酶类；金属蛋白酶__抑制因子［Abstract］O__ectiveToevaluatetheexpressionof__trixmetalloproteinase-7（___-7）andtissueinhibitorof__trixmetalloproteinase-1（TIMP-1）intransitional__llcarcino__ofbladder（TCCB）anditssignifican__.MethodsImmunohistochemistrywasusedtodetecttheexpressionof___-7andTIMP-1in60casesofBTCC（GradeⅠin25cases，GradeⅡin15，GradeⅢin20）and5su__ectswithnor__lbladdertissues.Ofthe60cases29hadsuperficial（≤pT1）bladdercan__rand31hadinvasive（≥pT2）bladdercan__r.χ2testwasusedtoassesstherelationshipbetweenexpressionof___-7，TIMP-1andtumorgrade，stage.ResultsTheexpressionof___-7andTIMP-1werenegativeinallnor__lbladdertissuesbuthighinBTCC.Ofthe60cases，40werepositiveand20werenegativefor___-

7.___-7positivitywascorrelatedwithhighhistogicalgrade，butnosignificantdifferen__wasobservedbetweensuperficialbladdercan__randinvasivebladdercan__r.32werepositiveand28werenegativeforTIMP-

1.TIMP-1wasnosignificantdifferen__indifferentpathologicalgradesordifferentclinicalstages.Buttheratioof___-7/TIMP-1wascorrelatedwithhighhistogicalgrade.Conclusion___-7andtheratioof___-7/TIMP-1couldreflectmoreaccuratelythe__lignantdegreeofBTCC.Theseresultswouldprovideanewsignificant__rkerinesti__teofprognosisinpatientswithBTCC.［Keywords］bladderneopla__as;carcino__;__trixmetalloproteinases;tissueinhibitorof__trixmetalloproteinases基质金属蛋白酶是人体内降解细胞外基质（extra__llular__trix，ECM）的主要酶类，在肿瘤演进等众多生理和病理过程中均发挥重要的作用［1］___-7是___s家族中的主要成员之一，与多种肿瘤的恶性生物学表现以及预后密切相关金属蛋白酶__抑制因子（TIMPs）通过下调___s的活性及分泌，而抑制肿瘤的浸润和转移［2］我们采用免疫组化方法检测60例膀胱移行细胞癌__标本中___-7和TIMP-1的表达，探讨___-

7、TIMP-1表达在膀胱移行细胞癌发生发展中的意义1材料与方法

1.1__标本2005年至2008年外科手术切除且经病理诊断的膀胱移行细胞癌__标本60例男52例，女8例年龄41～78岁病理分级按WHO标准，Ⅰ级25例，Ⅱ级15例，Ⅲ级20例临床分期按UICC-T__标准，浅表性癌（Tis～T1）29例，浸润性癌（T2～T4）31例5例正常膀胱__作为对照__均经福尔马林固定，常规石蜡包埋

1.2实验试剂一抗分别为鼠抗人___-7单克隆抗体，稀释度1∶75；鼠抗人TIMP-1单克隆抗体，稀释度为1∶100，二抗生物素标记兔抗鼠IgG及S-P试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术公司

1.3免疫__化学检测采用免疫组化S-P法石蜡标本作4μm厚连续切片，切片常规脱蜡，梯度酒精水化，抗原修复；3％过氧化氢孵育，加入一抗于4℃中孵育过夜滴加生物素标记二抗及S-P复合物DAB显色，苏木素复染，无水酒精脱水，二甲苯透明，中型树胶封片，光镜观察用已知胃癌阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照HE染色进行分级分期

1.4结果判定镜下观察，以肿瘤细胞、间质细胞中出现棕黄色颗粒判定为阳性细胞，高倍镜下随机观察三个不同视野并计数200个细胞，按阳性细胞率和显色强度分为三级，阳性细胞率＜25％或无显色为阴性（－），阳性细胞率25％～50％或显色浅为阳性（＋），阳性细胞率＞50%或显色深为强阳性（＋＋）

1.5统计学方法计量资料比较采用单因素方差分析，计数资料比较采用χ2检验，小样本资料使用Fisher精确检验法所有资料均输入计算机，用SPSS

11.5统计软件完成2结果

2.1___-7和TIMP-1在膀胱移行细胞癌及正常膀胱__中的表达情况膀胱移行细胞癌__中___-7的蛋白质表达只定位于癌细胞浆内，呈均匀棕黄色颗粒，集中分布于肿瘤浸润先端即肿瘤与间质交界处，癌__表层及__部均呈现弱表达，间质及正常上皮细胞为阴性表达60例膀胱移行细胞癌__中40例___-7阳性表达，阳性率为

66.7％对照组5例正常膀胱__标本全部呈阴性表达TIMP-1主要位于癌细胞胞膜、胞浆和肿瘤__间质内胞浆呈不同程度、基本均匀的棕色反应，呈巢状或片状分布于肿瘤病灶的周边区、间质及血管临界面，肿瘤__内部癌细胞表达较少60例膀胱移行细胞癌__中32例TIMP-1阳性表达，阳性率为

53.3％对照组5例正常膀胱__标本全部呈阴性表达

2.2___-

7、TIMP-1表达及___-7/TIMP-1比值与肿瘤分级分期的关系___-

7、TIMP-1蛋白表达与肿瘤分级、分期的关系见表1表1___-

7、TIMP-1表达与BTCC的分级、分期之间的关系经统计分析，膀胱移行细胞癌Ⅱ级和Ⅲ级的___-7阳性表达率差异无统计学意义（P＝

0.631），但Ⅰ级与Ⅱ级以及Ⅰ级与Ⅲ级之间的差异具有统计学意义（P＝

0.014，P=

0.001）___-7在侵犯到肌层的浸润性癌（T2～T4）中的阳性表达率与浅表性癌比较有升高的趋势，但无统计学意义（P=

0.465）TIMP-1的阳性表达随肿瘤的分级分期增加呈递增趋势，但差异无统计学意义（P＞

0.05）将___-

7、TIMP-1（－）、（＋）、（＋＋）表达分别记作

1、

2、3分，将半定量资料转化成定量资料，采用单因素方差分析发现，___-7/TIMP-1比值与肿瘤病理分级密切相关，随着分级增加呈递增趋势（P＜

0.05）___-7/TIMP-1比值在侵犯到肌层的浸润性癌与浅表性癌比较有升高的趋势，但无统计学意义（P＞

0.05）3讨论在肿瘤浸润和转移过程中，肿瘤细胞离开原发病灶，浸润肌层、周围__和血管等过程均需要突破细胞外基质和基底膜屏障，___家族在此过程中发挥了重要作用［3］___-7又称基质溶解素，是___家族中最小的__分子，也是一个比较重要的成员本试验结果显示，___-7在膀胱移行细胞癌__中的表达明显增高，在正常膀胱__中无表达，表明其可能在肿瘤的发生过程中起一定作用___-7主要集中在肿瘤浸润先端的癌细胞中高表达，说明了这些癌细胞可通过分泌___-7来降解周围细胞外基质，使自己更易于局部游走，侵入邻近毛细淋巴管及小静脉，促成局部浸润和远膈转移本实验结果还显示，___-7的表达与膀胱移行细胞癌的细胞分化程度有密切关系，随着癌细胞分级的增高，___-7的表达亦增强，提示分化越差的肿瘤表达___-7的能力越强，即肿瘤细胞产生蛋白降解酶的能力越强，利于肿瘤细胞降解细胞外基质和基底膜，发生浸润和转移另外，___-7的表达与浸润深度无显著相关性，浅表癌和浸润癌表达水平上的差异无统计学意义，在Ta、T1期已有明显表达，提示___-7在细胞发生恶性转化以后，在膀胱移行细胞癌的发生早期就参与癌的进展，如果阻断___-7的活性，可能阻止膀胱移行细胞癌发生浸润和转移［4］在正常情况下，___s的活性受到多种因素影响并在不同水平调节，包括基因转录、酶的合成分泌、酶原激活及抑制物的相互作用以酶原形式分泌出来的___s主要受TIMPs的抑制，TIMPs调控是___s活性的主要调节因子本试验结果显示，TIMP-1在正常膀胱__中无表达，在膀胱移行细胞癌__中有

53.3%表达，较___-7表达减弱，提示其对肿瘤细胞浸润、转移过程的抑制作用降低，这种降低的作用包括TIMP-1量和功能的异常TIMP-1的阳性表达与膀胱移行细胞癌的分级分期无显著相关，但___-7/TIMP-1比值与肿瘤病理分级密切相关，这可能与___s的调控有关国内外学者对于TIMPs在抑制肿瘤浸润与转移中的作用进行研究，认为___s与TIMPs之间的平衡与细胞外基质降解的关系可能更为密切［5］膀胱移行细胞癌中TIMP-1的高表达可能是对___-7过表达的一种反应性增高也就是说，随着膀胱移行细胞癌分级增高，___-7表达显著增高，而TIMP-1也表达增高，但其增高程度小于___-7这种___-7TIMP-1不平衡，使瘤细胞侵袭能力显著增强，导致恶___的发生___s与TIMPs在肿瘤浸润和转移过程中的相互作用，也为抗肿瘤转移治疗提供了一个重要靶点McCabe等［6］研究发现__二碳六烯酸（一种多烯不饱和脂肪酸，鱼油中含量较高）可通过提高TIMP-1表达抑制肾癌细胞的浸润目前某些具有___s抑制作用的药物已进入了Ⅲ期临床研究阶段［7］实验结果提示，___-7在细胞外基质和基膜降解中起重要作用，___-7及___-7/TIMP-1比率可反映膀胱移行细胞癌的恶性程度，为膀胱移行细胞癌的预后判断提供一种新的参考指标对___-7及TIMP-1的研究__可能为膀胱移行细胞癌的治疗提供一个新的途径【____】1VisseR，NagaseH.__trixmetallo-proteinaseandtissueinhibitorsofmetalloproteinase:structure，function，andbiochemistry.CircRes，2003，92:827-

839.2ItohY，NagaseH.__trixmetallo-proteinasesincan__r.EssaysBiochem，2002，38:21-

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137.4SumiT，YoshidaH，HyunY，etal.Expressionof__trixmetalloproteinasesinhu__ntransitional__llcarcino__oftheurinarybladder.OncolRep，2003，10

（2）:345-

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1227.。