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分子实验常用试剂、缓冲液的配制方法
1、1MTris-HCl组份浓度1MTris-HCl(pH
7.4,
7.6,
8.0)配制量1L配置方法
1.称量
121.1gTris置于1L烧杯中
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值pH值浓HCl
7.4约70mL
7.6约60mL
8.0约42mL
4.将溶解定容至1L
5.高温高压灭菌后,室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低
0.03个单位
2、
1.5MTris-HCl组份浓度
1.5MTris-HCl(pH
8.8)配制量1L配置方法
1.称取
181.7gTris置于1L烧杯中
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.用浓盐酸调pH值至
8.
84.将溶液定容至1L
5.高温高压灭菌后,室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低
0.03个单位
3、10×TEBuffer组份浓度100mMTris-HCl,10mMEDTA(pH
7.4,
7.6,
8.0)配制量1L配置方法
1.量取下列溶液,置于1L烧杯中1MTris-HClBuffer(pH
7.4,
7.6,
8.0)100mL500mMEDTA(pH
8.0)20mL
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合
3.将溶液定至1L后,高温高压灭菌
4.室温保存
4、3M醋酸钠组份浓度3M醋酸钠(pH
5.2)配制量100mL配置方法
1.称取
40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解
2.加入冰乙酸调节pH值至
5.
23.加入去离子水将溶液定容至100mL
4.高温高压灭菌后,室温保存
5、PBSBuffer组份浓度137mMNaCl,
2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量1L配置方法
1.称量下列试剂,置于1L烧杯中NaCl8gKCl
0.2gNa2HPO
41.42gKH2PO
40.27g
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.滴加HCl将pH值调节至
7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L
4.高温高压灭菌后,室温保存注意上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和
0.5mMM__l
26、10M醋酸铵组份浓度10M醋酸铵配制量100mL配置方法
1.称量
77.1g醋酸铵置于100~200mL烧杯中,加入约30mL的去离子水搅拌溶解
2.加去离子水将溶液定容至100mL
3.使用
0.22μm滤膜过滤除菌
4.密封瓶口于室温保存注意醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌
7、Tris-HCl平衡苯酚配置方法
1.使用原料大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验
2.操作注意苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇
3.苯酚平衡因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到
7.8以上,苯酚平衡操作方法如下
①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解
②加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度
0.1%该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色有助于方便识别有机相
③加入等体积的1MTris-HCl(pH
8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相
④重复操作步骤
③⑤加入等体积的
0.1MTris-HCl(pH
8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相
⑥重复操作步骤
⑤,稍微残留部分上层水相
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于
7.8
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存
8、苯酚/氯仿/异戊醇配置方法
1.说明从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇
(25241)氯仿可使蛋白
(25241)质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡
2.配置方法将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇
(241)均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存
9、10%(W/V)SDS组份浓度10%(W/V)SDS配制量100mL配置方法
1.称量10g高纯度的SDS置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水,68℃加热溶解
2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至
7.
23.将溶液定容至100mL后,室温保存
10、2NNaOH组份浓度2NNaOH配制量100mL配置方法
1.量取80mL去离子水置于100~200mL塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)
2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌
3.待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100mL
4.将溶液转移至塑料容器中后,室温保存
11、
2.5NHCl组份浓度
2.5NHCl配制量100mL配置方法
1.在
78.4mL的去离子水中加入
21.6mL的浓盐酸(
11.6N),均匀混合
2.室温保存
12、5MNaCl组份浓度5MNaCl配制量1L配置方法
1.称取
292.2gNaCl置于1L烧杯中,加入约800mL的去离子水后搅拌溶解
2.加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份
3.高温高压灭菌后,4℃保存
13、20%(W/V)Glucose组份浓度20%(W/V)Glucose配制量100mL配置方法
1.称取20gGlucose置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水后,搅拌溶解
2.加去离子水将溶液定容至100mL
3.高温高压灭菌后,4℃保存
14、SolutionI组份浓度25mMTris-HCl(pH
8.0),10mMEDTA,50mMGlucose(质粒提取用)配制量1L配置方法
1.量取下列溶液,置于1L烧杯中1MTris-HCl(pH
8.0)25mL
0.5MEDTA(pH
8.0)20mL20%Glucose(
1.11M)45mLdH2O910mL
2.高温高压灭菌后,4℃保存
3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA(20mg/mL)
15、SolutionII组份浓度250mMNaOH,1%(W/V)SDS(质粒提取用)配制量500mL配置方法
1.量取下列溶液置于500mL烧杯中10%SDS50mL2NNaOH50mL
2.加灭菌水定容至500mL,充分混匀
3.室温保存此溶液保存时间最好不要超过一个月注意SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌
16、SolutionIII组份浓度3MKOAc,5MCH3COOH(质粒提取用)配制量500mL配置方法
1.量取下列溶液置于500mL烧杯中KOAc147gCH3COOH
57.5mL
2.加入300mL去离子水后搅拌溶解
3.加去离子水将溶液定容至500mL
4.高温高压灭菌后,4℃保存
17、
0.5MEDTA组份浓度
0.5MEDTApH
8.0配制量1L配置方法
1.称取
186.1gNa2EDTA•2H2O,置于1L烧杯中
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌
3.用NaOH调节pH值值
8.0(约20gNaOH)注意pH值至
8.0时,EDTA才能完全溶解
4.加去离子水将溶液定容至1L
5.适量分成小份后,高温高压灭菌
6.室温保存
18、1MDTT组份浓度1MDTT配制量20mL配置方法
1.称取
3.09gDTT,加入到50mL塑料离心管内
2.加20mL的
0.01M的NaOAc(pH
5.2),溶解后使用
0.22μm滤器过滤除菌
3.适量分成小份后,-20℃保存
19、10mMATP组份浓度10mMATP配制量20mL配置方法
1.称取121mgNa2ATP•3H2O,加入到50mL塑料离心管内
2.加20mL的25mMTris-HCl(pH
8.0),搅拌溶解
3.适量分成小份,-20℃保存分子生物学实验常用培养基的配制方法
1、Ampicillin组份浓度100mg/mlAmpicillin(100mg/ml)配制量50mL配置方法
1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中
2.加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL
3.用
0.22μm滤膜过滤除菌
4.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存
2、IPTG组份浓度24mg/mLIPTG(24mg/mL)配制量50mL配置方法
1.称量
1.2gIPTG置于50mL离心管中
2.加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL
3.用
0.22μm滤膜过滤除菌
4.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存
3、X-Gal组份浓度20mg/mLX-Gal(20mg/mL)配制量50mL配置方法
1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中
2.加入40mLDMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50mL
3.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存
4、LB培养基组份浓度1%(W/V)Tryptone,
0.5%(W/V)YeastExtract,1%(W/V)NaCl配制量1L配置方法
1.称量下列试剂,置于1L烧杯中Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.滴加5NNaOH(约
0.2mL),调节pH值至
7.
04.高温高压灭菌后,4℃保存
5、LB/Amp培养基组份浓度1%(W/V)Tryptone
0.5%(W/V)YeastExtract1%(W/V)NaCl
0.1mg/mLAmpicillin配制量1L配置方法
1.称量下列试剂,置于1L烧杯中Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.滴加5NNaOH(约
0.2mL),调节pH值至
7.
04.加去离子水将培养基定容至1L
5.高温高压灭菌后,冷却至室温
6.加入1mLAmpicillin(100mg/mL)后均匀混合
7.4℃保存
6、TB培养基组份浓度
1.2%(W/V)Tryptone
2.4%(W/V)YeastExtract
0.4%(V/V)Gly__rol17mMKH2PO472mMK2HPO4配制量1L配置方法
1.配制磷酸盐缓冲液(
0.17MKH2PO4,
0.72MK2HPO4)100mL
2.称取下列试剂,置于1L烧杯中Tryptone12gYeastExtract24gGly__rol4mL
3.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
4.加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌
5.待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液
6.4℃保存
7、TB/Apm培养基组份浓度
1.2%(W/V)Tryptone
2.4%(W/V)YeastExtract
0.4%(V/V)Gly__rol17mMKH2PO472mMK2HPO
40.1mg/mLAmpicillin配制量1L配置方法
1.配制磷酸盐缓冲液(
0.17MKH2PO4,
0.72MK2HPO4)100mL溶解
2.31gKH2PO4和
2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100mL,高温高压灭菌
2.称取下列试剂,置于1L烧杯中Tryptone12gYeastExtract24gGly__rol4mL
3.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
4.加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌
5.待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mLAmpicillin(100mg/mL)
6.均匀混合后4℃保存
8、SOB培养基组份浓度2%(W/V)Tryptone
0.5%(W/V)YeastExtract
0.05%(W/V)NaCl
2.5mMKCl10mMM__l2配制量1L配置方法
1.配制250mMKCl溶液在90mL的去离子水中溶解
1.86gKCl后,定容至100mL
2.配制2MM__l2溶液在90mL的去离子水中溶解19gM__l2后,定容至100mL,高温高压灭菌
3.称取下列试剂,置于1L烧杯中Tryptone20gYeastExtract5gNaCl
0.5g
4.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解5量取10mL250mMKCl溶液,加入到烧杯中
6.滴加5NNaOH溶液(约
0.2mL),调节pH值至
7.
07.加入去离子水将培养基定容至1L
8.高温高压灭菌后,4℃保存
9.使用前加入5mL灭菌的2MM__l2溶液
9、SOC培养基组份浓度2%(W/V)Tryptone
0.5%(W/V)YeastExtract
0.05%(W/V)NaCl
2.5mMKCl10mMM__l220mM葡萄糖配制量100mL配置方法
1.配制1M葡萄糖溶液将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中,充分溶解后定容至100mL,用
0.22μm滤膜过滤除菌
2.向100mLSOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL,均匀混合
3.4℃保存
10、2×YT培养基组份浓度
1.6%(W/V)Tryptone,1%(W/V)YeastExtract,
0.5%(W/V)NaCl配制量1L配置方法
1.称取下列试剂,置于1L烧杯中Tryptone16gYeastExtract10gNaCl5g
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.滴加1NKOH,调节pH值至
7.
04..加水离子水将培养基定容至1L
5.高温高压后,4℃保存
11、Φb×broth培养基组份浓度2%(W/V)Tryptone,
0.5%(W/V)YeastExtract,
0.5%(W/V)MgSO4•7H2O配制量1L配置方法
1.称取下列试剂,置于1L烧杯中Tryptone20gYeastExtract5gMgSO4•7H2O5g
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.滴加1NKOH,调节pH值至
7.
54..加水离子水将培养基定容至1L
5.高温高压后,4℃保存
12、NZCYM培养基组份浓度
0.5%(W/V)YeastExtract
0.1%(W/V)CasaminoAcid1%(W/V)NZ胺
0.5%(W/V)NaCl
0.2%(W/V)MgSO4•7H2O配制量1L配置方法
1.称取下列试剂,置于1L烧杯中YeastExtract5gCasaminoAcid1gNZ胺10gNaCl5gMgSO4•7H2O2g
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.滴加5NNaOH溶液(约
0.2mL),调节pH值至
7.
04..加水离子水将培养基定容至1L
5.高温高压后,4℃保存
13、NZYM培养基组份浓度
0.5%(W/V)YeastExtract1%(W/V)NZ胺
0.5%(W/V)NaCl
0.2%(W/V)MgSO4•7H2O配置方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid(酪蛋白氨基酸)外,其他成份与NZCYM培养基相同
14、NZM培养基组份浓度1%(W/V)NZ胺
0.5%(W/V)NaCl
0.2%(W/V)MgSO4•7H2O配置方法NZM培养基除不含YeastExtract(酵母提取物)外,其他成份与NZYM培养基相同
15、一般固体培养基的配置方法
1.按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种配制Agar(琼脂铺制平板用)15g/LAgar(琼脂配制顶层琼脂用)7g/LAgarose(琼脂糖铺制平板用)15g/LAgarose(琼脂糖配制顶层琼脂用)7g/L
2.高温高压灭菌后,带上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此时培养基温度很高,小心烫伤)
3.待培养基冷却至50~60℃时,加入热不稳定物质(如抗生素),摇动容器充分混匀
4..铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养皿)
16、LB/Amp/X-Gal/IPTG组份浓度1%(W/V)Tryptone平板培养基
0.5%(W/V)YeastExtract1%(W/V)NaCl
0.1mg/mLAmpicillin
0.5%(W/V)IPTG
0.04mg/mLX-Gal
1.5%(W/V)Agar配制量1L配置方法
1.称取下列试剂,置于1L烧杯中Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.滴加5NNaOH溶液(约
0.2mL),调节pH值至
7.
04.加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar
5.高温高压灭菌后,冷却至60℃左右
6.加入1mLAmpicillin(100mg/mL)、1mLIPTG(24mg/mL)、2mLX-Gal(20mg/mL)后均匀混合
7.铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)
8.4℃保存平板
17、TB/Amp/X-Gal/IPTG组份浓度
1.2%(W/V)Tryptone平板培养基
2.4%(W/V)YeastExtract
0.4%(W/V)Gly__rol17mMKH2PO472mMK2HPO
40.1mg/mLAmpicillin
0.024mg/mLIPTG
0.04mg/mLX-Gal
1.5%(W/V)Agar配制量1L配置方法
1.配制磷酸盐缓冲液(
0.17MKH2PO4,
0.72MK2HPO4)100mL
2.称取下列试剂,置于1L烧杯中Tryptone12gYeastExtract24gGly__rol4mL
3.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解
4.加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar
5.高温高压灭菌后,冷却至60℃左右
6.加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mLAmpicillin(100mg/mL)、1mLIPTG(24mg/mL)、2mLX-Gal(20mg/mL)后均匀混合
7.铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)
8.4℃保存平板生物化学实验常用试剂的配制方法
1、
0.5mol/L氢氧化钠溶液组份浓度
0.5mol/L配制量2L配置方法
1.准确称取氢氧化钠40g
2.用去离子水溶解并稀释至2L
2、
0.5mol/L盐酸溶液组份浓度
0.5mol/L配制量2L配置方法
1.准确量取盐酸
83.4mL
2.用去离子水稀释至2L
4、
0.2%葡萄糖标准溶液组份浓度
0.2%配制量1L配置方法
1.称取葡萄糖
2.5g置于称量瓶中,在70℃干燥2小时
2.干燥器中冷却至室温,重复干燥,冷却至恒重
3.准确称取葡萄糖
2.000g
4.用去离子水溶解并定容至1L
5.于4℃保存
5、250μg/mL牛血清组份浓度250μg/mL白蛋白标准液配制量2L配置方法
1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白
2.用
0.03mol/LpH
7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L
3.4℃保存
6、Folin试剂甲配置方法
1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中,加入50g无水碳酸钠,溶解,待用
2.称取
0.5g酒石酸钾钠,溶于80mL去离子水中,加入
0.25g硫酸铜•5水,溶解
3.将12去离子水按2041的比例混合即可
4.4℃保存,可用一周
7、Folin试剂乙配置方法
1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠•2水
25.0359g,钼酸钠•2水
6.2526g,去离子水175mL,85%磷酸
12.5mL,浓盐酸25mL,充分混合
2.回流10小时,再加硫酸锂
37.5g,去离子水
12.5mL及数滴溴
3.然后开口沸腾15min,以驱除过量的溴,冷却后定容到250mL
4.于棕色瓶中保存,可使用多年注意上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左右,几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为应用液,我们这时是把贮备液于使用前稀释18倍,使之浓度为
0.1mol/L略高这种稀释18倍后的Folin试剂乙就是上文称之为的“应用液”Folin试剂乙贮备液浓度的标定,一般是以酚酞为指示剂用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液,当溶液颜色由红变为紫灰,再突然变成墨绿即为终点,如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙,终点不太好掌握,溶液地颜色是由浅黄变为浅绿,再变为灰紫色为终点
8、DNS试剂配置方法
1.取3,5-二硝基水杨酸10g加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL(3,5-二硝基水杨酸试剂)
2.将3,5-二硝基水杨酸溶解,然后加入酒石酸钾钠300g
3.待其完全溶解,用去离子水稀释至2000mL,棕色瓶保存
9、5%蔗糖溶液组份浓度5%配制量1L配置方法称取蔗糖50g,用去离子水溶解定容至1L
10、
0.1mol/L蔗糖溶液组份浓度
0.1mol/L配制量1L配置方法称取蔗糖
34.230g,用去离子水溶解并定容至1L
11、20%乙酸溶液组份浓度20%配制量
1.2L配置方法量取冰乙酸300mL,用去离子水稀释至1200mL
12、30%(W/V)Acrylamide组份浓度30%(W/V)Acrylamide
0.05%配制量1L配置方法
1.称量下列试剂,置于1L烧杯中Acrylamide290gBIS10g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.加入去离子水将溶液定容至1L,用
0.45μm滤膜滤去杂质
4.于棕色瓶中4℃保存注意丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用有积累性,配制时应戴手套等聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份
13、40%(W/V)Acrylamide组份浓度40%(W/V)Acrylamide
0.05%配制量1L配置方法
1.称量下列试剂,置于1L烧杯中Acrylamide380gBIS20g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.加入去离子水将溶液定容至1L,用
0.45μm滤膜滤去杂质
4.于棕色瓶中4℃保存注意丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用有积累性,配制时应戴手套等聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份
14、10%(W/V)过硫酸铵组份浓度10%(W/V)过硫酸铵配制量10mL配置方法
1.称取1g过硫酸铵
2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解
3.贮存于4℃注意10%过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右,超过期限会失去催化作用
15、考马斯亮蓝R-250染色液组份浓度
0.1%(W/V)考马斯亮蓝R-250,25%(V/V)异丙醇,10%(V/V)冰醋酸配制量1L配置方法
1.称取1g考马斯亮蓝R-250置于1L烧杯中
2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中,搅拌溶解
3.加入100mL的冰乙醋酸,均匀搅拌
4.加入650mL的去离子水,均匀搅拌
5.用滤纸出去颗粒物质后,室温保存
16、考马斯亮蓝染色脱色液组份浓度10%(V/V)醋酸,5%(V/V)乙醇配制量1L配置方法
1.量取下列溶液,置于1L烧杯中醋酸100mL乙醇50mLdH2O850mL
2.充分混合后使用
17、凝胶固定液组份浓度50%(V/V)甲醇,10%(V/V)醋酸SDS-PAGE银氨染色用配制量100L配置方法
1.量取下列溶液,置于1L烧杯中甲醇500mL醋酸100mLdH2O400mL
2.均匀混合后室温保存
18、凝胶处理液组份浓度50%(V/V)甲醇,10%(V/V)戊二醛SDS-PAGE银氨染色用配制量1L配置方法
1.量取下列溶液,置于1L烧杯中甲醇50mL戊二醛10mLdH2O40mL
2.均匀混合后室温保存
19、凝胶染色液组份浓度
0.4%(W/V)硝酸银,1%(V/V)浓氨水,SDS-PAGE银氨染色用
0.04%(W/V)氢氧化钠配制量100L配置方法
1.量取下列试剂,加入100~200mL试剂瓶中20%硝酸银2mL浓氨水1mL4%氢氧化钠1mLdH2O96mL
2.均匀混合该溶液应为无色透明状如氨水浓度过低时溶液会呈现混浊状,此时应补加浓氨水,直至透明
3.本染色液应现用现配,不宜保存
20、显影液组份浓度
0.005%(V/V)柠檬酸,
0.02%(V/V)甲醛SDS-PAGE银氨染色用配制量1L配置方法
1.称取下列试剂,置于1L试剂瓶中柠檬酸50mg甲醛
0.2mL
2.加入1L去离子水后,摇动混合后溶解
3.室温保存
21、45%乙醇溶液组份浓度45%配制量1L配置方法量取无水乙醇450mL,加入去离子水550mL,混匀
22、5%的十二烷基硫酸钠溶液组份浓度5%(W/V)配制量
0.1L配置方法:称取
5.0g十二烷基硫酸钠溶于100mL4%的乙醇溶液中
23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂配置方法取500mL三氯甲烷试剂,加入21mL异戊醇试剂,混匀
24、
1.6%乙醛溶液组份浓度
1.6%配制量
0.1L配置方法取47%乙醛
3.4mL,用去离子水定容至100mL
25、二苯胺试剂配置方法
1.称取二苯胺试剂
0.8g,溶解于180mL冰乙酸中,
2.再加入8mL高氯酸混匀
3.临用前加入
0.8mL
1.6%乙醛溶液注意配制完成后试剂应为无色
26、15%三氯乙酸溶液组份浓度15%配制量2L配置方法称取三氯乙酸300g,用去离子水溶解定容至2000mL
27、1%谷氨酸溶液组份浓度1%配制量
0.5L配置方法
1.称取5g谷氨酸,先用适量得用去离子水溶解
2.再用氢氧化钾溶液中和至中性
3.最后用去离子水定容至
0.5L
28、1%丙酮酸溶液组份浓度1%配制量
0.5L配置方法
1.称取5g丙氨酸,先用适量得用去离子水溶解
2.再用氢氧化钾溶液中和至中性
3.最后用去离子水定容至
0.5L
29、
0.1%的碳酸氢钾溶液组份浓度
0.1%配制量
0.5L配置方法称取碳酸氢钾
0.5g,用去离子水溶解定容至
0.5L
30、
0.05%的碘乙酸溶液组份浓度
0.05%配制量
0.25L配置方法称取
0.125g碘乙酸,用去离子水溶解定容至
0.25L
31、Locke氏溶液配制量2L配置方法称取18g氯化钠
0.84g氯化钾48g氯化钙
0.3g碳酸氢钠,2g葡萄糖,用去离子水溶解定容至2000mL
32、
0.2mol/L的丁酸溶液组份浓度
0.2mol/L配制量1L配置方法
1.量取18mL正丁酸试剂
2.用1mol/L的氢氧化钠中和
3.再用去离子水定容至1L
33、
0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液组份浓度
0.1mol/L配制量10L配置方法称
248.17g硫代硫酸钠,用去离子水溶解并定至10L
34、
0.1mol/L的碘溶液组份浓度
0.1mol/L配制量1L配置方法
1.称取碘
12.7g和碘化钾25g
2.用去离子水溶解并定容至1L
3.用
0.1mol/L的硫代硫酸钠标定
35、10%氢氧化钠溶液组份浓度10%配制量2L配置方法称取200g氢氧化钠,用去离子水溶解并定容至2L
36、10%盐酸溶液组份浓度10%配制量
0.2L配置方法量取浓盐酸
49.3mL,用去离子水定至
0.2mL
37、
0.1%标准丙氨酸溶液组份浓度
0.1%配制量
0.5L配置方法称取丙氨酸
0.5g,用去离子水溶解并定容至
0.5mL
38、
0.1%标准谷氨酸溶液组份浓度
0.1%配制量
0.5L配置方法称取谷氨酸
0.5g,用去离子水溶解并定容至500mL
39、
0.1%水合茚三酮乙醇溶液组份浓度
0.1%配制量1L配置方法称取1g水合茚三酮试剂,溶于1000mL无水乙醇中
40、酚溶液配置方法在大烧杯中加入80mL去离子水,再加入300g苯酚,在水浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内,轻轻振荡混合,使其成为乳状液静止7~10小时,乳状液变成两层透明溶液,下层为被水饱和的酚溶液,放出下层,贮存于棕色瓶中备用
41、
0.5%淀粉溶液组份浓度
0.5%配制量
0.1L配置方法称取淀粉
0.5g,用去离子水溶解定容至
0.1L
42、对羟基联苯试剂配置方法称取对羟基联苯
1.5g,溶于100mL
0.5%氢氧化钠溶液中,配制成
1.5%的溶液若对羟基联苯颜色较深,应用丙酮或无水乙醇重结晶,放置时间较长后,会出项针状结晶,应摇匀后使用生物化学实验常用缓冲液的配制方法
1、
0.2mol/L磷酸缓冲液组份浓度
0.2mol/L(pH
6.0)配制量1L配置方法
1.称取磷酸氢二钠•12水
8.82g
2.称取磷酸二氢钠•2水
27.34g
3.用去离子水溶解并定容至1L室温保存注意此为母液,使用时稀释40倍使用
2、洗脱液组份浓度
0.15mol/L(含
0.15mol/L氯配制量10L化钠的
0.005mol/L配置方法
1.称取氯化钠
87.66gpH
6.0的磷酸缓冲液)
2.用
0.2mol/LpH
6.0的磷酸缓冲液250mL溶解
3.用去离子水稀释至10L室温保存
3、
0.3mol/L磷酸缓冲液组份浓度
0.3mol/L(pH
7.8)配制量
0.5L配置方法
1.准确称取磷酸氢二钠•12水
49.150g
2.磷酸二氢钠•2水
2.000g
3.用去离子水溶解并定容至
0.5L室温保存注意此为母液,使用时稀释10倍使用
4、
0.2mol/L乙酸缓冲液组份浓度
0.2mol/L(pH
4.6)配制量2L配置方法
1.准确称取乙酸钠•3水
54.44g
2.加入23mL冰乙酸,溶解
3.用去离子水溶解并定容至2L4℃保存
5、
0.2mol/L磷酸-柠檬酸组份浓度
0.2mol/L缓冲液配制量各1L(pH
2.
6、
4.
6、
6.6)配置方法
1.母液A(
0.2mol/L的Na2HPO4溶液)称取Na2HPO4•12水
143.256g,用去离子水定容至2L
2.母液B(
0.1mol/L的柠檬酸溶液)称取柠檬酸•1水
42.028g用去离子水溶解定容至2L
3.pH
2.
6、
4.
6、
6.6的三种缓冲液如下表配制pH值A(mL)B(mL)
2.
6109.0__
1.
04.
6467.
5532.
56.
6727.
5272.
54.按上表混匀后,4℃保存
6、20×SSC缓冲液配制量1L(pH
7.0)配置方法
1.准确称取
175.2g氯化钠
2.准确称取
88.2g柠檬酸钠•2水
3.溶解于800mL去离子水中
4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至
7.
05.加去离子水定容至1L注意按实验需要可分装后高压灭菌10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到
7、
0.15mol/L氯化钠-组份浓度
0.15mol/L乙二胺四乙酸二钠配制量1L缓冲液配置方法
1.准确称取氯化钠
8.77g(pH
8.0)
2.称取乙二胺四乙酸二钠
37.2g
3.溶于800mL去离子水中
4.用固体的氢氧化钠调pH值为
8.
05.加去离子水定容至1L
8、1/15mol/L的磷酸盐组份浓度
0.15mol/L缓冲液配制量1L(pH
7.6)配置方法
1.溶液甲(1/15mol/L的KH2PO4溶液)称取KH2PO
49.078g,用去离子水溶解定容至1L
2.溶液乙1/15mol/L的Na2HPO4溶液:称取Na2HPO4•2水
11.876g(或磷酸氢二钠•12水
23.__4g)用去离子水溶解定容至1L
3.pH
7.6磷酸盐缓冲液将
①和
②按
1.
48.6比例混合即可
9、5×Tris-GlycineBuffer组份浓度
0.125MTris,
1.25MGlycine,
0.5%(w/v)SDS(SDS-PAGE电泳缓冲液)配制量1L配置方法
1.称取下列试剂,置于1L烧杯中Tris
15.1gGlycine94gSDS
5.0g
2.加入约800mL的去离子水,搅拌溶解
3.加去离子水将溶液定容至1L后,室温保存
10、5×SDS-PAGE组份浓度250mMTris-HCl(pH
6.8)LoadingBuffer%(W/V)10SDS
0.5%(W/V)BPB50%(V/V)甘油5%(W/V)β-巯基乙醇配制量5mL配置方法
1.量取下列试剂,置于10mL塑料离心管中1MTris-HCl
1.25mLSDS
0.5gBPB25mg甘油
2.5mL
2.加入去离子水溶解后定容至5mL
3.小份(500μl/份)分装后,于室温保存
4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中
5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右生物化学实验常用柱料数据及性质
1、DEAE阴离子交换纤维素
(1)纤维素的处理取纤维素干品用蒸馏水浸泡,充分溶涨并搅拌均匀,过夜次日再搅匀,静止30min留下沉集部分(重复3次),用真空泵抽干然后用适量的
0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min,抽干,蒸馏水洗至中性;再用适量的
0.5mol/L的盐酸溶液浸泡30min,抽干,蒸馏水洗至中性;重复用
0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min,抽干,蒸馏水洗至中性最后用
0.005mol/LpH
6.0的磷酸缓冲液浸泡待用
(2)纤维素的重生回收的纤维素先用
0.5mol/L氯化钠-
0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡,再按上述
(1)操作处理,即可再次投入使用
(3)纤维素的保存回收后,用
0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡30min后,蒸馏水洗至中性,抽干,于鼓风干燥箱中60℃烘干后,保存
2、SephadexG型葡聚糖凝胶
(1)凝胶的特性要点葡聚糖G后面的数字代表不同的交联度,数值越大交联度越小,吸水量越大其数值大致为吸水量X的10倍Sephadex对碱和弱酸稳定(在
0.1mol/L盐酸中可以浸泡1~2小时)在中性时可以高压灭菌不同型号中又有颗粒粗细之分颗粒粗的分离效果差,流速快颗粒越细分离效果越好,但流速也越慢交联葡聚糖工作时的pH稳定在2~11的范围内葡聚糖G型凝胶分离的分子量分级范围为700~8×105SephadexG型葡聚糖凝胶的数据见下表*本表数值取自Phar__ciaBiotechBiodirectory1996**为
2.6×30cm层析柱在25℃用蒸馏水测定之值D=Darcy’slaw2凝胶的溶胀*G系交联葡聚糖凝胶亲水性强,只能在水中溶胀(仅有少量的有机溶剂也可以使之溶胀),有机溶剂或含有有机溶剂较多的水溶液会改变其孔隙,使之收缩失去或降低凝胶的分离能力在水中溶胀时如在室温则需要较长时间,才能达到充分溶胀的程度,但可煮沸到100℃,以缩短其溶胀时间见下表SephadexG型葡聚糖凝胶溶胀所需时间凝胶型号G-10~G-200所需最小溶胀时间*20~22℃(室温)100℃(沸水浴)SephadexG-1031G-1531G-2531G-5031G-75243G-100725G-150725G-200725*溶胀时要将凝胶浸泡在过量的水或缓冲液中在整个溶胀过程中应避免剧烈地搅拌,尤其不能使用电磁搅拌,以免破坏了它的颗粒结构,以及产生许多碎末而影响洗脱时的流速
(3)凝胶的回收与保存凝胶的再生最好不要在柱上进行(有些凝胶可以在位清洗),可将凝胶在
0.5mol/L氯化钠及
0.5mol/L氢氧化钠的混合溶液中浸泡;一般约需30分钟以上然后用蒸馏水洗至中性,最后用缓冲液平衡即可恢复使用经常使用的凝胶,一般加入一些抗菌剂放在普通冰箱中,即可保存较长的时间如确切在相当长的时间里不准备使用时,则以保存干凝胶为好处理时可先用较浓的氯化钠浸泡(如
0.5mol/L)在用
0.5mol/L的氢氧化钠处理并用蒸馏水洗至中性,然后用递增百分比浓度的乙醇分多次作脱水处理一般可从30%的乙醇开始;每次均应让凝胶在乙醇中多浸泡一些时间在无水乙醇处理后,最后再用乙醚处理一次以加速乙醇的挥发处理后的凝胶宜在80℃以下的温度烘干在进行凝胶的回收时,如在每一步操作时,均使用布氏漏斗抽滤可大大地加快整个回收过程【注意】a.凝胶在氢氧化钠溶液中浸泡的时间不要太长b.不要图快过早地使用百分浓度太大地乙醇,以免凝胶颗粒收缩太快,破坏了它地结构,因而影响了它地分离能力c.在乙醚未充分挥发完以前,切不可将含有多量乙醚地凝胶放入烘箱,以免发生危险d.溶胀了地凝胶不可放入低温冰箱中冻结,以免其球形结构被破坏微生物学实验常用培养基的配制
1、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用)牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH
7.0~
7.2水1000mL121℃灭菌20min
2、高氏(Gause)1号培养基(培养放线菌用)可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠
0.5g磷酸氢二钾
0.5g硫酸镁
0.5g硫酸亚铁
0.01g琼脂20g水1000mLpH
7.2~
7.4配制时,先用少量冷水将淀粉调成糊状,倒入煮沸的水中,在火上加热,边搅拌边加入其他成分,溶化后,补足水分至1000mL121℃灭菌20min
3、查氏(Czapek)培养基(培养霉菌用)硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾
0.5g硫酸镁
0.5g硫酸亚铁
0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH自然121℃灭菌20min
4、马丁氏(__rtin)琼脂培养基(分离真菌用)葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁
0.5g1/3000孟加拉红(rosebengal,玫瑰红水溶液)100mL琼脂15—20gpH自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min临用前加入
0.03%链霉素稀释液100mL,使每毫升培养基中含链霉素30μg
5、马铃薯培养基(简称PDA)(培养真菌用)马铃薯200g蔗糖(或葡萄糖)20g琼脂15—20gpH自然培养基的配制马铃薯去皮,切成块煮沸30min,然后用纱布过滤,再加糖及琼脂,熔化后补足水至1000mL121℃灭菌30min
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制
1、取大麦或小麦若干,用水洗净,浸水6—12小时,至15℃阴暗处发芽,上面盖纱布一块,每日早、中、晚淋水一次,麦根伸长至麦粒的两倍时,即停止发芽,摊开晒干或烘干,贮存备用
2、将干麦芽磨碎,一份麦芽加四份水,在65℃水浴中糖化3—4小时,糖化程度可用碘滴定之加水约20mL,调匀至生泡沫时为止,然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤
3、将糖化液用4—6层纱布过滤,滤液如混浊不清,可用鸡蛋白澄清,方法是将一个鸡蛋白加水约20mL,调匀至生泡沫时为止,然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤
4、将滤液稀释到5—6波美度,pH约
6.4,加入2%琼脂即成121℃灭菌30min
7、无氮培养基(自生固氮菌、钾细菌)甘露醇(或葡萄糖)10g磷酸二氢钾
0.2g七水合硫酸镁
0.2g氯化钠
0.2g二水合硫酸钙
0.2g碳酸钙5g蒸馏水1000mLpH
7.0—
7.2113℃灭菌30min
8、半固体肉膏蛋白胨培养基肉膏蛋白胨液体培养基100mL琼脂
0.35—
0.4gpH
7.6121℃灭菌20min
9、合成培养基偏磷酸铵1g氯化钾
0.2g七水合硫酸镁
0.2g豆芽汁10mL琼脂20g蒸馏水1000mLpH
7.0加12mL
0.04%的溴钾酚紫(pH
5.2—
6.8,颜色由黄变紫,作指示剂)121℃灭菌20min
10、豆芽汁蔗糖(或葡萄糖)培养基黄豆芽100g蔗糖(或葡萄糖)50g水1000mLpH自然培养基的配制称新鲜豆芽100g,放入烧杯中,加入水1000mL,煮沸约30min,用纱布过滤用水补足原量,再加入蔗糖(或葡萄糖)50g,煮沸熔化121℃灭菌20min
11、油脂培养基蛋白胨10g牛肉膏5g氯化钠5g香油或花生油10g
1.6%中性红水溶液1mL琼脂15—20g蒸馏水1000mLpH
7.2121℃灭菌20min注
1、不能使用变质油
2、油和琼脂及水先加热
3、调好pH值后,再加入中性红
4、分装时,需不断搅拌,使油均匀分布于培养基中
12、淀粉培养基蛋白胨10g牛肉膏5g氯化钠5g可溶性淀粉2g蒸馏水1000mL琼脂15—20g121℃灭菌20min
13、明胶培养基牛肉膏蛋白胨液100mL明胶12—18gpH
7.6在水浴锅中将上述成分溶化,不断搅拌溶化后调pH
7.2—
7.4121℃灭菌30min
14、蛋白胨水培养基蛋白胨10g氯化钠5g蒸馏水1000mLpH
7.6121℃灭菌20min
15、糖发酵培养基蛋白胨水培养基1000mL
1.6%溴钾酚紫乙醇溶液1—2mLpH
7.6另配制20%糖溶液(葡萄糖、乳糖、蔗糖等)各10mL培养基的配制
1、将上述含指示剂的蛋白胨水培养基(pH
7.6)分装于试管中,在每管内放一倒置的小玻璃管(Durhamtube),使之充满培养液
2、将已分装好的蛋白胨水和20%的各种糖溶液分别灭菌,蛋白胨水121℃灭菌20min;糖溶液112℃灭菌30min
3、灭菌后,每管以无菌操作分别加入20%无菌糖溶液
0.5mL(按每10mL培养基中加入20%的糖液
0.5mL,则成1%的浓度)配制用的试管必须洗干净,避免结果混乱
16、葡萄糖蛋白胨水培养基蛋白胨5g葡糖糖5g磷酸氢二钾2g蒸馏水1000mL将上述各成分溶于1000mL水中,调pH
7.0—
7.2,过滤分装试管,每管10mL,112℃灭菌30min
17、麦氏(Meclary)琼脂(酵母菌)葡萄糖1g氯化钾
1.8g酵母浸膏
2.5g醋酸钠
8.2g琼脂15—20g蒸馏水1000mL113℃灭菌20min
18、柠檬酸盐培养基磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g氯化钠5g硫酸镁
0.2g柠檬酸钠2g琼脂15—20g蒸馏水1000mL1%溴麝香草酚蓝乙醇液10mL培养基的配制将上述各成分加热溶解后,调pH
6.8,然后加入指示剂,摇匀,用脱脂棉过滤制成后为黄绿色,分装试管,121℃灭菌20min后制成斜面,注意配制时控制好pH,不要过碱,以黄绿色为准
19、醋酸铅培养基pH
7.4的牛肉膏蛋白胨琼脂100mL硫代硫酸钠
0.25g10%醋酸铅水溶液1mL培养基的配制将牛肉膏蛋白胨琼脂100mL加热溶解,待冷却至60℃时加入硫代硫酸钠
0.25g,调至pH
7.2,分装于三角瓶中,115℃灭菌15min取出后待冷却至55—60℃,加入10%醋酸铅水溶液(无菌的)1mL,混匀后倒入灭菌试管或平板中
20、血琼脂培养基pH
7.6的牛肉膏蛋白胨琼脂100mL脱纤维羊血(或兔血)10mL培养基的配制将牛肉膏蛋白胨琼脂加热熔化,待冷却至50℃时,加入无菌脱纤维羊血(或兔血)摇匀后倒平板或制成斜面37℃过夜检查无菌生长即可使用
21、玉米粉蔗糖培养基玉米粉60g磷酸二氢钾3g维生素B1100mg蔗糖10g七水合硫酸镁
1.5g水1000mL121℃灭菌30min,维生素B1单独灭菌15min后另加
22、酵母膏麦芽汁琼脂麦芽粉3g酵母浸膏
0.1g水1000mL121℃灭菌30min
24、棉籽壳培养基培养基的配制棉籽壳50%,石灰粉1%,过磷酸钙1%,水65%—70%,按比例称好料,充分搅拌均匀后装瓶,较薄地平摊盘上
25、复红亚硫酸钠培养基(远藤氏培养基)蛋白胨10g乳糖10g磷酸氢二钾
3.5g琼脂20—30g蒸馏水1000mL5%碱性复红乙醇溶液20mL培养基的配制先将琼脂加入900mL蒸馏水中,加热溶解,再加入磷酸氢二钾及蛋白胨,使溶解,补足蒸馏水至1000mL,调pH至
7.2—
7.4加入乳糖,混匀溶解后,115℃灭菌20min称取亚硫酸钠置一无菌空试管中,加入无菌水少许使溶解,再在水浴中煮沸10min后立刻滴加于20mL5%碱性复红乙醇溶液中,直至深红色褪成淡粉红色为止将此亚硫酸钠与碱性复红的混合液全部加至上述已灭菌的并仍保持熔化状态的培养基中,充分混匀,倒平板,放冰箱中备用,贮存时间不宜超过2周
26、伊红美蓝培养基(EMB培养基)蛋白胨水培养基100mL20%乳糖溶液2mL2%伊红水溶液2mL
0.5%美蓝水溶液1mL培养基的配制将已灭菌的蛋白胨水培养基(pH
7.6)加热熔化,冷却至60℃左右时,再把已灭菌的乳糖溶液,伊红水溶液及美蓝水溶液按上述量以无菌操作加入摇匀后,立即倒平板乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度,115℃灭菌20min
27、乳糖蛋白胨培养液(“水的细菌学检查”用)蛋白胨10g牛肉膏3g乳糖5g氯化钠5g
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL蒸馏水1000mL培养基的配制将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中,调pH至
7.2—
7.4加入
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL,充分混匀,分装于有小倒管的试管中115℃灭菌20min
28、石蕊牛奶培养基牛奶粉100g石蕊
0.075g水1000mLpH
6.8121℃灭菌15min
29、LB(Luria-Bertani)培养基蛋白胨10g酵母膏5g氯化钠10g蒸馏水1000mLpH
7.0121℃灭菌20min
30、基本培养基磷酸氢二钾
10.5g磷酸二氢钾
4.5硫酸铵1g二水合柠檬酸钠
0.5g蒸馏水1000mL121℃灭菌20min需要时灭菌后加入糖(20%)10mL维生素B1(硫胺素)(1%)
0.5mL七水合硫酸镁(20%)1mL链霉素(50mg/mL)4mL,终浓度200μg/mL氨基酸(10mg/mL)4mL,终浓度40μg/mLpH自然(—
7.0)
31、庖肉培养基培养基的配制
1、取已去肌膜、脂肪之牛肉500g,切成小方块,置1000mL蒸馏水中,以弱火煮1小时,用纱布过滤,挤干肉汁,将肉汁保留备用将肉渣用绞肉机绞碎,或用刀切成细粒
2、将保留的肉汁加蒸馏水,使总体积为2000mL,加入蛋白胨20g,葡萄糖2g,氯化钠5g,及绞碎的肉渣,置烧瓶摇匀,加热使蛋白胨溶化
3、取上层溶液测量pH,并调整其达到
8.0,在烧瓶壁上用记号笔标示瓶内液体高度,121℃灭菌15min后补足蒸发的水分,重新调整pH值
8.0,再煮沸10—20min,补足水量后调整pH
7.
44、将烧瓶内容物摇匀,将溶液和肉渣分装于试管中,肉渣约占培养基的1/4左右经121℃灭菌15min后备用,如当日不用,应以无菌操作加入已灭菌的石蜡凡士林,以隔绝氧气
32、乳糖牛肉膏蛋白胨培养基乳糖5g牛肉膏5g酵母膏5g蛋白胨10g葡萄糖10g氯化钠5g琼脂粉15gpH
6.8水1000mL
33、马铃薯牛乳培养基培养基的配制200g马铃薯(去皮)煮出汁,脱脂鲜乳100mL,酵母膏5g,琼脂粉15g,加水1000mLpH
7.0制平板培养基时,牛乳与其他成分分开灭菌,倒平板前再混合
34、尿素琼脂培养基尿素20g琼脂15g氯化钠5g磷酸二氢钾2g蛋白胨1g酚红
0.012g蒸馏水1000mLpH
6.8±
0.2培养基的配制在蒸馏水或去离子水100mL中,加入上述所有成分(除琼脂外)混合均匀过滤灭菌将琼脂加入900mL蒸馏水或去离子水中,加热煮沸腾在15磅121℃灭菌15min冷却至50℃,加入灭菌好的基本培养基,混匀后,分装于灭菌的试管中,放在倾斜位置上使其凝固微生物学实验常用试剂的配制
1、3%酸性乙醇溶液浓盐酸3mL95%乙醇97mL
2、中性红指示剂中性红
0.04g95%乙醇28mL蒸馏水72mL中性pH
6.8~8颜色由红变黄,常用浓度为
0.04%
3、淀粉水解试验用碘液(卢戈氏碘液)碘片1g碘化钾2g蒸馏水300mL先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘全溶后,加足水分即可
4、溴甲酚紫指示剂溴甲酚紫
0.04g
0.01mol/LNaOH
7.4g蒸馏水
92.6mL溴甲酚紫pH
5.2~
5.6,颜色由黄变紫,常用浓度为
0.04%
5、溴麝香草酚蓝指示剂溴麝香草酚蓝
0.04g
0.01mol/LNaOH
6.4mL蒸馏水
93.6mL溴麝香草酚蓝pH
6.0~
7.6,颜色由黄变蓝,常用浓度为
0.04%
6、甲基红试剂甲基红(Methylred)
0.04g95%乙醇60mL蒸馏水40mL先将甲基红溶于95%乙醇中,然后加入蒸馏水即可
7、V﹒P﹒Y试剂1.5%α-萘酚无水乙醇溶液α-萘酚5g无水乙醇100mL2.40%KOH溶液KOH40g用蒸馏水定容至100mL即可
8、吲哚试剂对二甲基氨基苯甲醛2g95%乙醇190mL浓盐酸40mL玻璃仪器的洗涤及各种洗涤液的配制实验中所使用的玻璃器皿清洁与否直接影响实验结果由于器皿的不清洁或被污染,往往造成较大的实验误差,甚至会出现相反的实验结果因此,玻璃器皿的洗涤清洁工作是非常重要的玻璃器皿在使用前必须洗刷干净将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中,用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸溜水冲洗移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来不及蒸馏水冲洗洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干备用
1.初用玻璃器皿的清洗新__的玻璃器皿表面常附着有游离的碱性物质,先用肥皂水(或去污粉)洗刷,再用自来水洗净,然后浸泡在1%~2%盐酸溶液中过夜(不少于4h),再用自来水冲洗,最后用蒸馏水冲洗2~3次,在100~130℃烘箱内烘干备用
2.使用过的玻璃器皿的清洗
(1)一般玻璃器皿如试管、烧杯、锥形瓶等(包括量筒)先用自来水洗刷至无污物,再选用大小合适的毛刷蘸取去污粉(掺入肥皂粉)刷洗或浸入肥皂水内将器皿内外,特别是内壁,细心刷洗,用自来水冲洗干净后再用蒸馏水洗2~3次,热的肥皂水去污能力更强,可有效地洗去器皿上的油污洗衣粉与去污粉较难冲洗干净而常在器壁上附有一层微小粒子,故要用水多次甚至10次以上充分冲洗,或可用稀盐酸摇洗一次,再用水冲洗烘干或倒置在清洁处备用凡洗净的玻璃器皿,不应在器壁上带有水珠,否则表示尚未洗干净,应再按上述方法重新洗涤若发现内壁有难以去掉的污迹,应分别使用下述的各种洗涤剂予以清除,再重新冲洗用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油,要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次,使油垢溶解再在肥皂水中煮5~10min,用软布或脱脂棉擦拭,立即用自来水冲洗,然后在稀洗涤液中浸泡
0.5~2h自来水冲去洗涤液最后用蒸馏水换洗数次待干后浸于95%乙醇中保存备用.使用时在火焰上烧去乙醇用此法洗涤和保存的载玻片和盖玻片清洁透亮,没有水珠检查过活菌的载玻片或盖玻片应先在2%新洁尔灭溶液中浸泡24h,然后上述方法洗涤方法洗涤与保存玻璃器皿经洗涤后,若内壁的水均匀分布成一薄层,表示油垢完全洗净,若挂有水珠,则还需要用洗涤液浸泡数小时,然后用自来水充分冲洗,最后用蒸馏水洗2~3次后备用
(2)量器如吸量管、滴定管、量瓶等使用后应立即浸泡于凉水中,勿使物质干涸工作完毕后用流水冲洗,以除去附着的试剂、蛋白质等物质,晾干后浸泡在铬酸洗液中4~6h(或过夜),再用自来水充分冲洗,最后用蒸馏水冲洗2~4次,风干备用
(3)其他具有传染性样品的容器(如分子克隆、病毒玷污过的容器)常规先进行高压灭菌或其他形势的消毒,再进行清洗盛过各种__(特别是剧毒药品和放射性核素物质的容器)必须经过专门处理,确知没有残余毒物存在时方可进行清洗否则使用一次性容器装有固体培养基的器皿应先将其刮去,然后洗涤带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酸皂溶液(来苏水)或
0.25%新洁尔灭消毒液内24h或煮沸
0.5h再用上述方法洗涤
3.洗涤液的种类和配制方法
(1)铬酸洗液(重铬酸钾一硫酸洗液,简称洗液或清洁液)广泛用于玻璃器皿的洗涤,常用的配制方法有4种
①取100mL工业浓硫酸置于烧杯内,小心加热,然后慢慢地加入重铬酸钾粉末,边加边搅拌,待全部溶解后冷却,贮于带玻璃塞的细口瓶内
②称取5g重铬酸钾粉末置于250mL烧杯中,加水5mL,尽量使其溶解慢慢加入100mL浓硫酸,边加边搅拌,冷却后贮存备用
③称取80g重铬酸钾,溶于1000mL自来水中,慢慢加入工业浓硫酸1000mL,边加边搅拌
④称取200g重铬酸钾,溶于500mL自来水中,慢慢加入工业浓硫酸500mL,边加边搅拌
(2)浓盐酸(工业用)可洗去水垢或某些无机盐沉淀
(3)5%草酸溶液可洗去高锰酸钾的痕迹
(4)5%~10%磷酸三钠(Na__O4·12H2O)溶液可洗涤油污物
(5)30%硝酸溶液洗涤CO2测定仪器及微量滴管
(6)5%~10%乙二铵四乙酸二钠(EDTA)溶液加热煮沸可洗去玻璃器皿内壁的白色沉淀物
(7)尿素洗涤液为蛋白质的良好溶剂,适用于洗涤盛蛋白质制剂及血样的容器
(8)酒精与浓硝酸混合液最适合于洗净滴定管,在滴定管中加入3mL酒精,然后沿管壁慢慢加入4mL浓硝酸(相对密度
1.4),盖住滴定管管口利用所产生的氧化氮洗净滴定管
(9)有机溶液如丙酮、乙醇、乙醚等可用于洗脱油脂、脂溶性染料等污痕二甲苯可洗去油漆污垢
(10)氢氧化钾-乙醇溶液和含有高锰酸钾的氢氧化钠溶液它是两种强碱性的洗涤液,对玻璃器皿的侵蚀性很强,清除容器内壁污垢,洗涤时间不宜过长使用时应小心谨慎上述洗涤液可多次使用,但使用前必须将待洗涤的玻璃器皿先用水冲洗多次,除去肥皂液、去污粉或各种废液若仪器上有凡士林或羊毛脂时,应先用软纸擦去,然后再用乙醇或乙醚擦净否则会使洗涤液迅速失效例如肥皂水、有机溶剂(乙醇、甲醛等)及少量油污物均会使重铬酸钾-硫酸液变绿,降低洗涤能力
4.细胞培养级玻璃器皿的洗涤处理
(1)按上述方法对玻璃器皿进行初洗,晾干
(2)将玻璃器皿浸泡入洗液中,24~48h注意玻璃器皿内应全部充满洗液,操作时小心勿将洗液不溅到衣服及身体各部
(3)取出,沥去多余的洗液
(4)自来水充分冲洗
(5)排列6桶水,前3桶为去离子水,后3桶为去离子双蒸水
(6)将玻璃器皿依次过6桶水,玻璃器皿在每桶中过6~8次
(7)倒置,60℃烘干
(8)用硫酸纸包扎,160℃干烤3h。