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长沙医学院长沙医学院毕业设计论文课题名称蔓荆子总黄酮中主要化学成分的研究学生姓名陈小娟学号12009050601079系、年级专业药学系、09级本科药学班指导教师李艳辉曹丽芝职称讲师主任药师2013年05月01日诚信声明本文郑重声明所呈交的学位论文,是本人在指导老师的指导下,独立进行研究所取得的成果,成果不存在知识产权争议除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担作者签名日期年月日目录中文TOC\o1-3\h\z\u摘要1Abstract2第一章引言
41.1蔓荆子化学成分研究
41.
1.1黄酮类化合物
41.
1.2酚类
41.
1.3苯丙素类
41.
1.4萜类、甾类化合物
51.
1.5挥发油、氨基酸等其它成分
51.2黄酮类化合物的研究概况
51.
2.1黄酮类化合物的分布
51.
2.2黄酮类化合物的结构和分类
61.3黄酮类化合物的生理活性
61.
3.1抗氧化及抗自由基作用
61.
3.2对心血管系统的作用
61.
3.3抗癌、防癌作用
71.
3.4抗炎、抗菌、抗病毒作用
71.
3.5泻下作用
81.
3.6降血糖作用
81.4黄酮类化合物的开发与利用
81.
4.1市场前景
81.
4.2黄酮资源开发
91.5结语9第二章仪器与试剂
102.1试剂与材料
102.2仪器10第三章 提取分离
113.1预实验
113.2TLC试验探索洗脱体系
123.3硅胶柱层析分离
123.4聚酰胺柱层析分离
123.5硅胶柱层析分离流分1-413第四章结果与讨论16参考文献17致谢18蔓荆子总黄酮中主要化学成分的研究陈小娟长沙医学院2009级药学专业指导老师曹丽芝李艳辉中文摘要目的蔓荆子为马鞭草科牡荆属单叶蔓荆VitextrifoliaL.var.simplicifoliaCham.或VitexrotundifoliaL.或三叶蔓荆VitextrifoliaL.的干燥成熟果实,主要产于山东、广西、云南、江西、浙江、福建、及广东等地为常用中药,具有疏散风热、清利头目、止痛的功效,临床上用于治疗风热、感冒头痛、偏头痛等症据报道,蔓荆子的主要活性成分是黄酮类化合物,为丰富蔓荆子的应用基础研究成果,为开发和利用传统中药蔓荆子本论文对蔓荆子药材中黄酮类化合物进行了研究方法实验主要采用有机溶剂提取;聚酰胺柱层析;硅胶柱层析等方法结果从蔓荆子总黄酮中分离得到了12个混合组分,并分离出一绿色化合物结论可采用聚酰胺柱层析和硅胶柱层析的方法对蔓荆子总黄酮中的主要化学成分进行分离关键词蔓荆子;黄酮类化合物;分离纯化StudiesontheFlavonoidsConstituentsoftheFruitsofFructusViticisDepartmentofPharmacyChangshaMedicalUniversityXiaojuanChenAdviser:LizhiCaoYanhuiLiAbstractObjective FructusViticisisthedriedandripefruitsofVitextrifoliaL.Var.simplicifoliaCham.orVitexrotundifoliaL.,whichareplantsbelongtoVitexofVerbenaceaefamily.ItdistributesmainlyinShandong,GuangxiYunnan,Jiangxi,Zhejiang,FujianandGuangdong.ItisatraditionalChinesemedicinebewidelyusedinclinicaltreatment.Becauseithasthefunctionsofclearingheat,keepingmindclearandkillingpain,soitcanbeusedtotreatfever,headache,migraineetc.ItisreportedthatflavonoidsaremainactiveconstituentsinFructusViticis.Inordertobetterexploitandmakegooduseofthismedicine,inthispaperwehavemadestudiesonflavonoidsinfruitsofVitextrifoliaL.var.simplicifoliaCham.Methods:InordertoinvestigatetheconstituentsinthisplantsevermethodshavebeenusedintheprocessofextractionandseparationincludingpolyamidechromatographycolumnCCsilca-gelCC,pre-TLCandsoon.Result12hybridcomponentsandapuregreencomponendwereisolatedfromViticistotalflavonoids.Conclusion PolyamidecolumnchromatographyandsilicagelcolumnchromatographymethodscanbeusedtoseparatethemainchemicalcomponentsintotalflavonoidsofFructusViticis.Keywords:FructusViticis;flavonoidsconstituents;isolationandPurification第一章引言蔓荆子为马鞭草科牡荆属单叶蔓荆VitextrifoliaL.var.simplicifoliaCham.或VitexrotundifoliaL.或三叶蔓荆VitextrifoliaL.的干燥成熟果实,主要产于山东、广西、云南、江西、浙江、福建、及广东等地为辛凉解表常用药,具有疏散风热、清利头目、止痛的功效,用于治疗风热、感冒头痛、偏头痛等症,民间有“云南天麻”之称被收载于
1977、
1955、
1990、
2000、2005年中华人民共和国药典,系常用中药
1.1蔓荆子化学成分研究关于蔓荆子化学成分的研究,据文献报道,从中分离的化学成分主要有黄酮类、酚类、苯丙素类、萜类和甾类化合物等
1.
1.1黄酮类化合物目前从文献报道中,黄酮类在蔓荆子中主要有黄酮类、二氢黄酮类及其相应的苷类已分离的黄酮类成分包括紫花牡荆素,3,6,7-三甲氧基槲皮万寿菊素
[1],木犀草素,Crysosplenol、penduletin及2S-53’-二羟基-674’-三甲氧基二氢黄酮
[2]木犀草素-7-氧葡萄糖苷,异荭草素,牡荆素等黄酮类和二氢黄酮类化合物现代药理表明,蔓荆子中的黄酮类化合物是蔓荆子中的主要活性成分
1.
1.2酚类目前从蔓荆子中分离出来的酚类主要有4-hydroxybenzoicacidmethylestervanillicacidmethylester4-hydroxybenzaldehyde4-hydroxybenzoicacidandferulicacid34-二羟基苯甲酸
[3]
1.
1.3苯丙素类根据相关文献报道,已从蔓荆子中分离出的苯丙素类化合物有vitrofolalAvitrofolalBvitrofolalCvitrofolalDdihydro-diconifery-lalc-b-D-2`-O-p-hydroxybenzoylglucosidedihydro-diconifery-lalc-9-O-b-D-glucoside等
[4]
1.
1.4萜类、甾类化合物萜类化合物在蔓荆子中主要有二萜类和环烯醚萜类二萜类化合物是蔓荆子主要的特征成分,至今已从该植物中分离得到多个此类化合物,其中主要为labdane型结构,亦有部分abitane型二萜已分离得到的成分有蔓荆呋喃萜rotundifuran和前蔓荆呋喃萜prerotundifuran,无羁萜friedelin、β-谷甾醇、β-谷甾醇-β-D-葡萄糖苷、β-谷甾醇-3-O-葡萄糖苷等日本学者OnoM
[5]等对蔓荆子进行了较深入的研究,已从蔓荆子中分离到数十个二萜类化合物,包括vitexifolinA,vitexifolinB,vitexifolinC,vitexifolinD,vitexifolinE,vitetrifolinD,trisnor-gamma-lactone,iso-ambreinolide等
1.
1.5挥发油、氨基酸等其它成分蔓荆子及其叶中所含挥发油的主要成分为崁烯camphene和蒎烯pinene
[6]同时,蔓荆子中还含有多种氨基酸杨洁等对蔓荆子中各种氨基酸的含量进行了测定,结果测得风干蔓荆子中含18种氨基酸,其中有异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、撷氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸这八种人体必需氨基酸此外,蔓荆子中亦含有维生素E以及Cu,Zn等无机元素
[7]
1.2黄酮类化合物的研究概况
1.
2.1黄酮类化合物的分布黄酮类化合物是一类低分子量的广泛分布于植物界的天然植物成分,为植物多酚类的代谢物,数量之多列天然酚性化合物之首,大多具有颜色从植物系统学的角度,植物体产生黄酮的能力与植物体木质化性质密切相关因此黄酮类化合物主要分布在维管束植物中,而在其它较低等的植物类群中分布较少而其中大多集中于被子植物中,如豆科、蔷薇科等在这些植物中此类化合物的类型最全,结构最复杂,含量也最高苔类中含有的黄酮类化合物为数不多,而藻类、微生物、细菌中没有发现黄酮类化合物的存在
[8]有文献记载约有20%的中草药中含有黄酮类化合物,可见其资源之丰富
1.
2.2黄酮类化合物的结构和分类以前,黄酮类化合物主要是指基本母核为2-苯基色原酮的一系列化合物,现在则是泛指两个苯环A环与B环通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物天然的黄酮类化合物几乎在A、B环上均有取代基,一般是轻基、甲氧基和异戊烯基等在植物体中,黄酮类化合物因其所在组织不同,其存在状态也呈多样化在木质部多以昔元形式存在;在花、叶、果实等器宫多以糖试形式存在根据中央三碳链的氧化程度、B环连接位置2-位或3-位以及三碳链是否成环状等特点,可将黄酮类化合物分为黄酮类、二氢黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮醇类、异黄酮类、二氢异黄酮类、黄烷醇类、花色素类、查耳酮类、二氢查耳酮类、双苯毗酮类、橙酮等
1.3黄酮类化合物的生理活性
1.
3.1抗氧化及抗自由基作用自由基性质活泼,有极强的氧化反应能力,对人体有很大的危害性,在体内自由基和脂质过氧化作用使多种大分子成分,如核酸、蛋白质产生氧化变性,DNA交联和断裂,导致细胞结构改变和功能破坏,而引起癌症、衰老及心血管等退变性疾病
[9]生物体内常见的自由基有超氧自由基O2·-、羟自由基·OH、烷氧自由基(RO·黄酮类化合物具有清除自由基和抗氧化的能力,其作用机理在于它阻止了自由基在体内产生三个阶段:l与O2·-反应阻断自由基的引发连锁反应;2与金属离子鳌合阻断自由基生成;3与脂质过氧基Roo·反应阻断脂质过氧化过程
1.
3.2对心血管系统的作用
1.
3.
2.1对血压的影响黄酮类化合物对高血压引起的头痛、项强、头晕、耳鸣等症状有明显的疗效,尤以缓解头痛、项强为显著葛根素对正常和高血压动物都有一定的降压作用,静注葛根素能使正常麻醉犬的血压短暂而明显地降低,也能显著降低清醒自发性高血压大鼠SHR血压
[10]从桑根皮中分得的MoruceninA、C及KuwanonG、H在大白鼠及家兔身上有明显的降压作用
[11]
1.
3.
2.2抑制血小板的凝集黄酮类化合物对凝血因子具有较强的抑制作用,故表现出较好的抗凝血作用实验表明不同浓度的黄酮类化合物可以不同程度地抑制二磷酸腺昔ADP诱导的大鼠血小板凝集,对5-轻色胺和ADP联合诱导的家免和绵羊血小板凝集也有同样的抑制作用
[12]此外黄酮类化合物还可降低血管内皮细胞轻脯酸代谢,使内壁的胶原或胶原纤维含量相对减少,利于防止血小板粘附凝集和血栓形成,有利于防治动脉粥样硬化据报道,棚皮素等黄酮类化合物对由ADP、胶原或凝血酶引起的血小板聚集及血栓形成也有抑制作用这与一些含有黄酮类成分的活血化疲中草药的作用机制可能有某种程度的内在联系
[13]
1.
3.
2.3对外周血管的影响静注黄酮类化合物于麻醉犬后,全部动物的脑血流量增加且血管阻力相应降低,还能使乙酞胆碱引起的脑内动脉扩张和去甲肾上腺素引起的收缩减弱,使处于异常状态下的血管功能恢复上常水平
[14]此外还可以改善异丙肾上腺素引起的小鼠微循环障碍,使毛细血管前小动脉管径增加,流速加快
1.
3.3抗癌、防癌作用黄酮类化合物具有较强的抗癌防癌作用,一般可通过以下三种途径:l对抗自由基;2直接抑制癌细胞生长;3对抗致癌促癌因子陈晓莉等
[15]用MTT快速测定法及流式细胞仪分析黄酮类化合物对靶细胞人肝癌SMMC-772的抗癌药效表明,此类物质有较强的抗癌活性,与丝裂霉素MMC联合用药抗癌活性显著增强,流式细胞仪分析细胞分裂周期各时象DNA变化显示,此类物质使S期细胞明显减少,增殖指数降低,并诱导凋亡据报道,牡荆素、汉黄答素等具有抑制肿瘤细胞的作用
1.
3.4抗炎、抗菌、抗病毒作用黄酮类化合物具有明显的消炎、抗溃疡作用白凤梅等
[16]研究表明天然黄酮对小鼠急性胃溃疡有明显的消退作用,肯定了高剂量的黄酮提取物200mg/mL能使胃粘液增加并且减轻胃的损伤芦丁及其衍生物轻乙基芦丁、二氢棚皮素以及橙皮昔一甲基查耳酮HMC等据报道对角叉菜胶、5-HT及PEG诱发的大鼠足爪水肿、甲醛引起的关节炎及棉球肉芽肿等均有明显的抑制作用黄酮类化合物的抗炎作用可能与前列腺素PEG生物合成过程中的脂氧化酶受到抑制有关
[17]黄答试、黄答素、木犀草素具有抗菌作用此外研究表明芦丁黄酮类化合物具有抗流感病毒、脊髓灰质炎病毒的感染和复制能力
1.
3.5泻下作用如中药营实中的营实昔A有致泻作用
[17]
1.
3.6降血糖作用黄酮类化合物能够促使胰岛β细胞的恢复,降低血糖和血清胆固醇,改善糖耐量,对抗肾上腺素的升血糖作用,并能抑制醛糖还原酶
1.4黄酮类化合物的开发与利用
1.
4.1市场前景随着食品工业的发展和消费水平的不断提高,人们越来越注重强身键体,改善饮食习惯,提高生活质量于是保健食品以其天然性、实效性等特点在世界范围内成为人们追逐的目标在众多的天然活性成分中黄酮类化合物是极有应用潜力的资源之一黄酮类化合物在人体不能直接合成,只能从食品中获得,而黄酮类化合物广泛存在于植物体中,因此近十多年来各国科学家都积极关注着从植物体中提取纯度高、活性强的天然黄酮成分,并进一步加工成具有抗癌、抗衰老、调节内分泌等特异功能的保健食品和药品等产品这些产品可调节人体生理功能,提高生命运动质量,为食用者带来健康体魄目前黄酮类化合物一般可采取如下两种利用方式:l直接应用含黄酮的植物提取液制成保健品食品;2将含黄酮的植物提取液经浓缩、分离纯化、干燥等精制步骤,制取高纯度的黄酮类化合物
1.
4.2黄酮资源开发黄酮类化合物可用于制备抗心血管病药物、抗肝脏毒药物、止咳平喘药、天然抗氧化剂、无公害农药等
1.5结语通过以上综述,我们可以看出国内外对蔓荆子的化学成分以及黄酮类化合物的药理作用进行了大量的研究工作,这为我们的进一步研究提供了方便同时我们也可以看到蔓荆子黄酮类成分值得进一步研究,但由于蔓荆子药材的质量评价标准仍不够规范和先进,这严重影响了蔓荆子及其制剂的质量评价系统的建立和产品质量的提高为了更好地开发利用该植物丰富的天然资源,建立规范、先进的蔓荆子质量评价体系,我们有必要深入进行化学成分及药理活性研究,为综合开发利用本植物提供理论依据第二章仪器与试剂
2.1试剂与材料正丁醇化学纯CP国药集团化学试剂有限公司甲醇分析纯AR天津市福晨化学试剂厂乙酸乙酯分析纯AR天津市福晨化学试剂厂三氯甲烷分析纯AR国药集团化学试剂有限公司石油醚(60-90℃)分析纯AR天津市富宇精细化工有限公司柱层析用聚酰胺(30-60,80-100目)浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂柱层析用硅胶(100-200,300-400目)青岛海浪硅胶干燥剂厂蔓荆子总黄酮湖南师范大学医学院天然药物化学教研室提供
2.2仪器电子天平JY2002上海良平仪器仪表有限公司旋转蒸发仪R-1001N郑州长城科工贸有限公司低温冷却液循环泵郑州长盛实验仪器有限公司HH-S恒温水浴锅江苏金坛县医疗仪器厂循环水式真空泵郑州长城科工贸有限公司ZF-2型三用紫外仪上海市安亭电子仪器厂202型电热恒温干燥箱北京中兴伟业仪器有限公司第三章 提取分离
3.1预实验1取1g蔓荆子总黄酮样品于50ml圆底烧瓶中2加入30ml氯仿,于75℃水浴加热回流提取
1.5小时,过滤,回收滤液,再加入30ml氯仿加热回流提取1小时,过滤,收集滤液,合并两次滤液即得氯仿萃取液3经氯仿萃取后的滤渣用同样的方法再分别依次用乙酸乙酯、正丁醇加热回流提取,收集滤液,分别得到乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液4将三种萃取液经减压浓缩,干燥后得固体粉末,再分别称重,各部分重量依次为
0.19g、
0.06g、
0.11g,最后残留的固体粉末为
0.05g5对三种提取物做TLC检识,用氯仿和乙酸乙酯以合理的比例作展开剂,经试验探索,当氯仿与乙酸乙酯比例为10:2时,氯仿提取部分中各成分分离效果较好,在紫外灯下观察有四个以上的明显斑点,并在Rf值小于
0.17的范围内有拖尾现象,而其他两部分中各成分未能分离总结由于经氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别提取得到的固体重量比例为4:2:1,氯仿提取物所占比重最大,且用氯仿和乙酸乙酯为展开剂做TLC检识时,氯仿提取物分离效果较好,因考虑到实验的完成期限,故本实验仅对氯仿提取部分各成分进行研究
3.2总黄酮主要成分的提取分离
3.
2.1提取分离流程图图
3.1提取分离流程图
3.
2.2TLC试验探索洗脱体系经实验探索,发现当使用氯仿-乙酸乙酯(10:
0.8)洗脱系统时样品中各成分分离效果最佳
3.3硅胶柱层析分离1拌样将棕色固体29g进行硅胶柱层析,先将固体溶于氯仿中,再加入100-200目的硅胶50g搅拌均匀,减压回收溶剂,取出样品,自然挥干残留溶剂2装柱将300g硅胶(300-400目)用氯仿湿法装柱(柱子直径φ=
7.5cm,H=120cm),待沉降完全后,测得硅胶的高度为20cm,上样后样品硅胶高度为5cm3洗脱用氯仿:乙酸乙酯=10:
0.8的混合洗脱液洗柱,收集各流分但从开始加入洗脱液后流速越来越慢,后完全停滞,以致最后不出流分流分收集失败分析原因可能是由于室温过低,样品在氯仿-乙酸乙酯系统中溶解度较低而导致结晶析出,化合物的结晶形成坚固的实体溶剂不易把结晶层渗透故柱子几乎不会有溶剂滴出(柱口处有结晶)4回收样品将流动相,上样硅胶,装柱硅胶取出,用甲醇提取回收样品,干燥后称重,得棕色固体25g
3.4聚酰胺柱层析分离1拌样将棕色固体25g进行聚酰胺柱层析,先将固体溶于氯仿中,加入30-60目聚酰胺40g搅拌均匀,减压回收溶剂,取出样品,自然挥干残留溶剂2装住将80-100目聚酰胺300g用乙酸乙酯湿法装柱,待沉降完全后,聚酰胺高度为20cm,上样样品高度为5cm3洗脱-浓缩依次用乙酸乙酯甲醇=20:
1、18:1梯度洗脱柱子,共接流分11分,每份50-100ml,最后用甲醇洗脱4TLC检识(氯仿:乙酸乙酯=10:
0.8)合并相同流分,1-
4、5-
6、
7、
8、
9、
10、11,发现流分1-4在紫外灯下斑点明显且清晰,同时由于时间关系,因此先对流分1-4(极性较小)进行下一步分离
3.5硅胶柱层析分离流分1-41探索洗脱系统及洗脱剂的比例当石油醚:乙酸乙酯=5:4时,各成分分离效果较好,故选择石油醚-乙酸乙酯溶剂系统比例为5:42称样,拌样样品量为
5.5g,用硅胶(100-200目)10g加乙酸乙酯拌样,减压回收溶剂,取出样品,自然挥干残留溶剂3上柱分两根柱子上柱(因没有合适大小的柱子,故选择两个柱子同时上柱)a. φ=3cm的柱子,取60g硅胶(300-400目)用石油醚湿法上柱,待沉降完全后高度为
30.5cm,取10g已拌样品加入,高度为
3.5cm,开始用洗脱液洗柱,接流分,每管15-25mlb.φ=
2.5cm的柱子,取45g硅胶(300-400目)用石油醚湿法上柱,待沉降完全后高度为32cm,将剩下的已拌样品加入,高度为
3.7cm,开始用洗脱液洗脱,接流分,每管15-25ml4TLC检识φ=3cm的柱子共接流分51份,经TLC检识(展开剂为石油醚:乙酸乙酯=5:4),合并的相同流分为1-
5、6-
9、10-
12、13-
16、20-
22、23-
30、31-
32、33-
41、42-51;部分TLC检识结果如图展开剂石油醚乙酸乙酯(5:4)图
3.2流分(1-6)、(7-9)、(10-12)、(13-16)、17-23图
3.3流分23-35图
3.4流分35-50φ=
2.5cm的柱子共接流分28份,经TLC检识合并的相同流分为5’-7’、8’-9’、10’-12’、13’-16’、18’-23’、24’-28’部分TLC检识结果如图展开剂石油醚乙酸乙酯(5:4)图
3.5流分1’-13’图
3.6流分13’-26’展开剂石油醚乙酸乙酯4:6)图
3.7流分(18’-23’)、24’-28’、29’-39’5经TLC检识,可将23-30(φ=3cm)与13’-16’(φ=
2.5cm)、33-41(φ=3cm)与18’-23’(φ=
2.5cm)、42-51(φ=3cm)与24’-28’(φ=
2.5cm)合并,然后减压浓缩6将两根柱子继续洗脱,接流分52-64(φ=3cm)、29’-39’(φ=
2.5cm)7做TLC检识,将相同流分合并,分别为52-
53、54-64(φ=3cm)和30’-39’(φ=
2.5cm),然后减压浓缩层析分离流程图如下a.φ=3cm的柱子;b.φ=
2.5cm的柱子图
3.8φ=3cm的柱子图
3.9φ=
2.5cm的柱子第四章结果与讨论本实验采用氯仿加热提取,通过聚酰胺柱粗分离,将蔓荆子总黄酮中不同极性的化合物分离开并富集,再使用硅胶柱对分离得到的物质进行进一步的细分,由于时间的关系,本实验先选择极性较小的部分化合物(聚酰胺柱流分1-4)进行分离将流分42-51(φ=3cm)与24’-28’(φ=
2.5cm)合并,减压浓缩后,自然挥干溶剂,得到一绿色物质,总重为220mg,经TLC检识,为单一物质TLC检识结果如图所示(展开剂石油醚乙酸乙酯=1:3,Rf值为
0.53)图
3.10TLC检识结果图此外,图
3.本次试验还得到了12个混合组分,由于时间的关系没能继续下一步的分离工作,这些混合组分大部分可以继续进行柱层析分离,得到单体所以本试验也为以后的工作提供了方便,同时打下了坚实的基础参考文献
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17.9.致谢本研究及学位论文是在我的指导老师曹丽芝老师和李艳辉老师的亲切关怀和悉心指导下完成的在每次实验设计遇到问题时两位老师不辞辛苦地讲解才使得我的设计顺利地进行从设计的选题到资料的搜集直至最后设计的修改的整个过程中,花费了曹老师很多的宝贵时间和精力从选题到论文的完成,李老师都始终给予我细心的指导和不懈的支持她们严肃的科学态度,严谨的治学精神,精益求精的工作作风,深深地感染和激励着我在此谨向两位老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意导师严谨的治学态度,开拓进取的精神和高度的责任心都将使学生受益终生!在此,我还要感谢跟我一起密切合作的同学们,以及在实验过程中提供宝贵意见的师兄师姐们,如果没有你们的帮助,此次实验的完成将变得非常困难同时,还要感谢大学四年来为我们打下药学专业知识基础的所有的老师们;也感谢实习单位为我提供良好的做毕业设计的环境此次毕业设计才会顺利完成还要感谢我的家人一直以来对我的关心和支持!最后我再一次向所有在毕业设计中帮助过我的老师和同学们表示衷心感谢衷心祝愿母校长沙医学院的明天更美好!。