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实验十紫外分光光度法测定水中总酚的含量
一、实验目的1.掌握紫外分光光度法测定酚的原理和方法2.掌握应用紫外分光光度计进行定量分析的方法和基本操作
二、实验原理苯酚是工业废水中的一种有害物质,如果流入江河,会使水质受到污染,因此在检测饮用水的卫生质量时,需对水中酚含量进行测定苯具有环状共轭体系,由π→π*跃迁在紫外吸收光区产生三个特征吸收带强度较高的E1带,出现在180__左右;中等强度的E2带,出现在204__左右;强度较弱的B带,出现在255__有机溶剂、苯环上的取代基及其取代位置都可能对最大吸收峰的波长、强度和形状产生影响具有苯环结构的化合物在紫外光区均有较强的特征吸收峰,在苯环上的部分取代基(助色团)使吸收增强,而苯酚在270__处有特征吸收峰,在一定范围内其吸收强度与苯酚的含量成正比,符合Lambert-Beer定律,因此,可用紫外分光光度法直接测定水中总酚的含量
三、仪器与试剂紫外可见分光光度计,石英比色皿(1cm)2个,50mL容量瓶,移液管等苯酚标准溶液250mg·L-1准确称取
0.0250g苯酚于250mL烧杯,加20mL去离子水溶解,移入100mL容量瓶,用去离子水定容至刻度,摇匀
四、实验步骤1.标准系列溶液的配制取5只50mL容量瓶,分别加入
2.00,
4.00,
6.00,
8.00,
10.00mL浓度为250mg·L-1的苯酚标准溶液,用去离子水稀释至刻度,摇匀计算其浓度(mg·L-1)2.吸收曲线的测定取上述标准系列中的任一溶液,用1cm石英比色皿,以溶剂空白(去离子水)作参比,在220~350__波长范围内,扫描绘制吸收曲线3.标准曲线的测定选择苯酚的最大吸收波长(λ__x),用1cm石英比色皿,以溶剂空白(去离子水)作参比,按浓度由低到高顺序依次测定苯酚标准溶液的吸光度4.水样的测定在与上述测定标准曲线相同的条件下,测定水样的吸光度
五、数据记录与处理1.以吸光度为纵坐标,波长为横坐标绘制吸收曲线,找出最大吸收波长λ__x,并计算其ε__x2.以吸光度为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线然后,根据水样吸光度在标准曲线上查出相对应的浓度值,计算出水样中苯酚的含量(g·L-1)
六、思考题1.紫外分光光度法与可见分光光度法有何异同?2.紫外分光光度计与可见分光光度计的仪器部件有什么不同?3.在用分光光度计进行定量分析时,哪些操作可能影响测定结果的准确性?附PELambda35紫外光谱仪使用操作指南
1、开机确认仪器比色槽为空,打开主机电源,预热10min开启电脑,进入Win98系统,然后启动Lambda35控制软件,进入界面
2、扫描吸收曲线在“Methods”界面中选择“Scan”选项卡,双击打开“yh-
00.MSC”方法文件__工具栏上的“Start”按钮,稍等,屏幕提示放入空白溶液在外侧比色槽中放入装去离子水的比色皿,合上仓盖,__“确定”稍等一会儿,屏幕提示放入样品“V-01”,打开仓盖,取出去离子水的比色皿,放入另一装有需进行波长扫描的样品溶液比色皿,合上仓盖,__“确定”,即开始波长扫描从Graph1窗口中可查看所得扫描曲线,找出最大吸收波长
3、标准曲线和样品溶液的测定回到“Methods”窗口,选择“Conc”选项卡,从给出的方法文件中双击打开“yh-
00.MCO”文件,设置测定波长,标准溶液的浓度等参数__工具栏上的“Start”按钮,稍等,屏幕提示放入空白溶液空白校正后,按照提示,依次放入A
01、A
02、A
03、A
04、A05标准溶液和样品溶液进行测定从结果显示窗口可读取相应的吸光度数值,并可查看标准曲线
4、测量完毕,将容量瓶带回实验室清洗干净。