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高中生物实验试剂配制方法 徐以润江苏灌南县高级中学
(222500)
1、斐林试剂 试剂甲将
34.5克结晶硫酸铜溶于500亳升水中,加
0.5亳升硫酸,混合均匀 试剂乙将125克氢氧化钠和137克酒石酸钾钠溶于500毫升蒸馏水中(贮于带橡皮塞的瓶中) ※临用时试剂甲与试剂乙等量混合※斐林试剂是由氢氧化钠的质量分数为
0.1g/mL的溶液和硫酸铜的质量分数为
0.05g/mL的溶液配制而成的它与可溶性的还原性糖葡萄糖、果糖和麦芽糖在加热的条件下,能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀因此,斐林试剂常用于检测可溶性的还原性糖的存在与否
2、双缩脲试剂 取10g氢氧化钠放入量筒中加水至100mL待充分溶解后倒入试剂瓶中配成质量浓度为
0.1g/mL的氢氧化钠溶液瓶口塞上胶塞贴上标签写上试剂A 取1g硫酸铜放入量筒中加水至100mL待充分溶解后倒入试剂瓶中配成质量浓度为
0.01g/mL的硫酸铜溶液蓝色瓶口塞上胶塞贴上标签写上试剂B※双缩脲试剂使用时,先向蛋白质溶液中加入NaOH溶液(2mL),振荡摇匀,然后再加入3~4滴CuSO4溶液,与蛋白质发生紫色反应,因此,双缩脲试剂常用于检测蛋白质的存在与否注意∶林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成,但二者有如下三点不同
(1)溶液浓度不同斐林试剂中NaOH溶液称为斐林试剂甲,其浓度为
0.1g/mlCuSO4溶液称为斐林试剂乙,其浓度为
0.05g/ml;双缩脲试剂中NaOH溶液(双缩脲试剂A)的浓度为
0.1g/ml,CuSO4溶液(双缩脲试剂B)的浓度为
0.01g/ml
(2)使用原理不同斐林试剂是新配制的CuOH2溶液,它在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2O沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应双缩脲反应实质是在碱性环境下的Cu2+与双缩脲试剂发生的紫色反应而蛋白质分子中含有很多与双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生紫色反应,可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在
(3)使用方法不同斐林试剂使用时,先将NaOH溶液和CuSO4溶液混合(将4~5滴CuSO4溶液滴入2mlNaOH溶液中),而后立即使用双缩脲试剂使用时,先加入NaOH溶液(2mL),振荡摇匀,造成碱性的反应环境,然后再加入3~4滴CuSO4溶液,振荡摇匀后观察现象
3、苏丹Ⅲ试剂(用于脂肪的检测)
0.1克苏丹Ⅲ溶于20毫升95%酒精中,因脂肪可溶于酒精中,因此染色脂肪不得超过10分钟
4、二苯胺试剂(用于DNA的鉴定) 将1克二苯胺溶液于100ML冰醋酸中,再加
2.75毫升浓硫酸(置冰箱中可保存根6个月,使用前在室温下摇匀)
5、苔黑酚——乙醇溶液(用于RNA的鉴定) 溶解6克苔黑酚于是100毫升95%乙醇中,(可在冰箱中保存1个月)
6、班氏试剂(用于尿糖的检测) 溶85克柠檬酸钠及50克无水碳酸钠于400毫升水中另溶
8.5克硫酸铜于500毫升热水中将硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠——碳酸钠溶液中,边加边搅拌如有沉淀可过滤此混合液可长期使用
7、醋酸洋红染液(用于染色体的染色) 冰醋酸45ML+55ML蒸馏水+
0.5克洋红 先将洋红溶于蒸馏水中,再加入冰醋酸充分摇匀后,加热煮沸10分钟,待冷却后,即可使用
8、有丝分裂细胞解离液 38%盐酸和95%酒精按11的比例配成解离液
9、有丝分裂细胞染液 医用紫药水和蒸馏水按116的比例混合配成染色液
10、吲哚酚试剂(用于VC的鉴定) 将
0.1克吲哚酚粉未溶于是100ML水中
13、卡诺氏固定液(用于细胞有丝分裂根尖的固定) 酒精冰醋酸=31(体积比)
12、20%肝脏研磨液(用于酶的高效性验证) 1份肝脏4份水用剪子迅速将肝脏剪碎,先加少量的水研研磨,用剩余的水冲洗。