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第
五、六章分子生物学研究方法练习题1
一、【单项选择题】
1.一般的限制性核酸内切酶II作用的特点不包括A.在对称序列处切开DNAB.DNA两链的切点常不在同一位点C.酶切后产生的DNA片段多半具有粘性末端D.DNA两链的切点常在同一位点，E.酶辨认的碱基一般为4-6个
4.下列关于建立cDNA文库的叙述哪项是错误的A.从特定组织或细胞中提取mRNAB.将特定细胞的DNA用限制性核酸内切酶切割后，克隆到噬菌体或质粒中C.用逆转录酶合成mRNA的对应单股DNAD.用DNA聚合酶，以单股DNA为模板合成双链DNA
5.限制性核酸内切酶的通常识别序列是A.粘性末端B.RNA聚合酶附着点C.回文对称序列D.多聚腺苷酸E.甲基化的“帽”结构
9.基因工程的操作程序可简单地概括为A.载体和目的基因的分离、提纯与鉴定B.分、切、连、转、筛，C.将重组体导入宿主细胞，筛选出含目的基因的菌株D.将载体和目的基因接合成重组体E.限制性核酸内切酶的应用
11.常用质粒有以下特征A.是线性双链DNAB.插入片段的容量比λ噬菌体DNA大C.含有抗生素抗性基因，D.含有同一限制性核酸内切酶的多个切口E.不随细菌繁殖而进行自我复制
14.表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是A.大肠杆菌表达体系B.原核表达体系C.酵母表达体系D.昆虫E.哺乳类细胞表达体系，
18.在分子生物学上“重组DNA技术”又称为A.酶工程B.蛋白质工程C.细胞工程D.发酵工程E.分子克隆技术
22.基因组代表一个细胞或生物的A.部分遗传信息B.整套遗传信息，C.可转录基因D.非转录基因E.可表达基因
25.在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是A.化学合成法B.基因组文库法C.cDNA文库法D.PCRE.差异显示法
27.PCR主要的酶是A.DNA连接酶B.反转录酶C.末端转移酶D.碱性磷酸酶E.TaqDNA聚合酶
28.重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.DNA连接酶D.RNA连接酶E.限制性核酸内切酶
30.最常用的筛选转化细菌是否含重组质粒的方法是A.营养互补筛选B.抗药性筛选，C.免疫化学筛选D.PCR筛选E.分子杂交筛选
33.用于重组DNA的限制性核酸内切酶，识别核苷酸序列的A.正超螺旋结构B.负超螺旋结构C.α-螺旋结构D.回文结构，E.锌指结构
58、基因治疗是指A．对有基因缺陷的细胞进行修复，从而使其恢复正常，达到治疗疾病的目的B．把健康的外源基因导入到有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的C．运用人工诱变的方法，使有基因缺陷的细胞发生基因突变恢复正常D．运用基因工程技术，把有缺陷的基因切除，达到治疗疾病的目的93．PCR实验的特异性主要取决于A．DNA聚合酶的种类 B．反应体系中模板DNA的量C．引物序列的结构和长度 D．四种dNTP的浓度 E．循环周期的次数94．基因剔除（knockout）的方法主要被用来研究A．基因的结构B．基因的功能C．基因的表达D．基因的调控E．基因的突变95．反义核酸作用主要是A．封闭DNAB．封闭RNAC．降解DNAD．降解DNAE．封闭核糖体的功能
105.酵母单杂交技术是分析【】的实验系统ADNA–proteininteractionsBRNA–proteininteractionsCProtein–proteininteractionsDSimultaneousprotein–proteinandprotein–DNAinteractions
106.酵母双杂交技术是分析【】的实验系统ADNA–proteininteractionsBRNA–proteininteractionsCProtein–proteininteractionsDSimultaneousprotein–proteinandprotein–DNAinteractions
108.研究水稻某转录因子与特定应答元件作用的方法可采用【】Ayeast one-hybridsystemByeasttwo-hybridsystemC yeastthree-hybridsystemDyeastone-two-hybridsystem【单项选择题参考答案】
一、选择题D
14.E
15.B
16.D克隆载体强调的是克隆即大量复制
37.ES1核酸酶的主要功能是，催化RNA和单链DNA分子降解成为5′单核苷酸同时它也能作用于双链核酸分子的单链区，并从此处切断核酸分子.降解酶S1:降解单链DNA或RNA产生带5’磷酸的单核苷酸或寡聚核苷酸，同时也可切割双链核酸分子的单链区
38.E作为单选题目E是最准确的，A方向不对；5‘端补平是端粒酶的功劳，末端标记是DNA的聚合酶的主要用途之一；大肠杆菌三种酶只有I具有5’-3’外切活性，所以缺口平移不是III；测序酶（SequenaseTM）是一种经过化学修饰的T7噬菌体DNA聚合酶这酶原来具有很强的3→5外切核酸活性，经过修饰后，这一活性大部分均被消除这题目是单选题目，E更合适，因为D中的I125I和131I:碘放射性同位素在70年代曾 被广泛应用于核酸探针的标记
51.E
52.E
53.注意影响PCR正常扩增的因素很多，几乎涉及到反应中的全部因素，
54.A
55.B
57.D
58.B
59.B
60.C通常使用抗药性标记筛选而不是直接用表达产物筛选
61.A
62.B
63.D
64.C
65.D
66.C
67.B
68.E
69.C
70.D
71.C
72.E
73.B
74.B
75.D
76.C
77.A
78.E
79.A
80.A
81.E
82.C
83.D
84.E
85.D
86.A
87.A
88.E
89.E注意人类基因组计划的原初技术是要制备四张图
90.B
91.E
92.D
93.C
94.B
95.B
96.C
97.C
98.C
99.D
100.C
101.B
102.D
103.B
104.C
105.A
106.C
107.D
108..A
109.A
110.A
111.B
112.B
113.D
二、【名词解释】
1.DNA重组不同来源的DNA分子可以通过末端共价连接（磷酸二酯键）而形成组合的DNA分子，这一过程称为DNA重组
6.PCR PCR又称基因体外扩增特定序列方法是在反应体系中加入模板DNA、dNTP、特定设计的引物及耐热的DNA聚合酶，经多次变性、退火、延伸循环反应，使目的DNA呈指数形式合成的过程
7.载体是携带外源基因，实现外源基因的扩增或表达所采用的DNA分子常用克隆载体有质粒DNA、噬菌体DNA、粘粒DNA、病毒DNA等
8.转化指将质粒或其它外源DNA导入处于感受态的宿主细胞，并使其获得新的表型的过程转化常用的宿主细胞是大肠杆菌信号的检测分析，即可得出样品分子的数量和序列信息
17.基因治疗:基因治疗是指以正常基因矫正替代缺陷基因，或从基因水平调控细胞中缺陷基因的表达的一种治疗疾病的方法
三、【多项至少两个选项的选择题】6．克隆致病相关基因的策略包括A．定位克隆 B．非定位候选克隆C．功能克隆 D．定位候选克隆E．随机克隆
13.关于克隆的描述A.DNA分子克隆或基因克隆是指核苷酸序列相同的一群DNA分子或基因拷贝；B.细胞克隆则是来源于同一祖细胞的、基因型完全相同的一群子细胞；C.个体克隆则是指基因型相同的个体的拷贝D.克隆是指由遗传组成完全相同的分子、细胞或个体组成的一个群体E.克隆就是无性繁殖
14.DNA操作中常用的载体的种类有A.细菌质粒B.l噬菌体C.M13噬菌体D.粘粒E.酵母质粒
18.下列叙述正确的是A.基因组DNA文库从特定组织提取的染色体基因组DNA而构建B.cDNAlibrary是从特定组织mRNA反转录成的cDNA拷贝而构建C.基因组DNA文库目的是分离有用的目的基因和保存某种生物的全部基因D.cDNAlibrary目的是分离某一特定器官在特定发育时期细胞内的mRNAE.genomicDNAlibrary是用于研究基因组成的，cDNAlibrary用于研究基因表达的
19.根据所有载体的特征，基因组文库可以分为A.质粒文库B.噬菌体文库C.粘粒文库D.细菌人工染色体文库E.酵母人工染色体文库
20.人工染色体载体有A.YACB.BACC.PACD.MACE.HAEC
23.cDNA文库的特点A.有基因特异性B.有器官特异性C.代谢或发育特异性D.分子不均匀性E.可表达性
31.下列说法正确的是A.RNA提取试剂Trizol主要是由酚与异硫氰酸胍组成的均相溶液B.用Trizol提取RNA时，可以不用对离心管进行DEPC处理C．纯化RNA可以用硅胶膜纯化柱D.低温操作能够在一定程度上抑制RNA降解E．总RNA电泳中28S和18SrRNA亮度接近2:1时说明RNA质量较好
32.原位杂交insituhybridization包括A.菌落原位杂交B.噬菌斑原位杂交C.细胞原位杂交D.组织块原位杂交E.染色体原位杂交
35.克隆有差异表达的目的基因的方法A.mRNA差别显示技术（DDRT-PCR）B.抑制性差减杂交SSHC.cDNA差示分析（RDA）D.代表性差异分析（RAD）E.差减杂交（SH）
36.关于RACE的描述正确的是A.3’RACE是利用mRNA的polyA尾巴设计锚定引物B.5’RACE是利用末端转移酶向第一链cDNA的3’端增加polyG尾巴设计锚定引物C.利用基因的中间序列设计基因特异的引物GSPD.改进的5’RACE通常用MMLV可以在cDNA末端特异地加上3-4个甚至更多个dCTPE.从一个相同的cDNA模板进行5‘和3‘RACE至少要获得mRNA的23-28个核苷酸序列信息
39.定点突变技术可以用来【】A引入新的酶切位点B修饰表达载体C改造DNA调控元件的特征序列D改变蛋白质的氨基酸残基E改变酶的催化活性
40.常用于转基因小鼠的制作方法有【】A受精卵雄原核显微注射法B胚胎干细胞（ES细胞）法C逆转录病毒感染法D体细胞核移植法ETi质粒介导法
41.转基因拟南芥的制作方法有【】A花粉管介导法B根癌农杆菌介导法C基因枪介导法D精子介导法E反转录病毒介导法
44.下列分子技术能用于基因打靶研究的有【】A.geneknockout技术B.ZFN技术C.TALEN技术D.TailPCR技术E.蛋白质磷酸化技术 【多项选择题答案】6．ABCD
13.ABCD
14.ABCDE
18.ABCDE
19.ABCDE
22.ABCDE
23.ABCDE
31.ABCDE
32.ABCDE
33.ABCDE
34.ABCD
35.ABCDE
36.AB现在通常用polyGCDE
37.ABC
38.ABCDE
39.ABCDE
40.ABCD
41.ABC
42.ABCED
43.ABC
44.ABC
六、【简答题】
1.简述基因工程的主要过程答
（1）目的基因的获取
（2）克隆载体的选择与构建
（3）目的基因与载体的连接
（4）重组DNA分子导入受体细胞
（5）重组体的筛选鉴定
（6）克隆基因的表达
2.什么是载体？可分几类？答载体是为携带外源基因，实现外源基因的扩增或表达所采用的DNA分子可分为质粒、噬菌体、粘粒、病毒等
3、什么是基因敲除技术（geneknock-out/down）？答又称基因打靶（genetargeting）这种技术是通过基因工程的方法将一个结构已知但功能未知的基因去除，或用其他序列相近的基因取代（又称基因敲入），然后从整体观察实验动物，从而推测相应基因的功能这种人为地把实验动物某一种有功能的基因完全缺失的技术称为基因敲除技术
4、什么是定点突变？答定点突变（site－directedmutagenesis）是重组DNA进化的基础，该方法通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码的氨基酸序列，常用于研究某个（些）氨基酸残疾对蛋白质的结构、催化活性以及结合配体能力的影响，也可用于改造DNA调控元件特征序列、维修表达载体、引入新的酶切位点等。
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