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《体内药物分析》课程作业
一、问答题第X章题目要求1什么是体内药物分析?与常规药物分析相比,体内药物分析有哪些特点?答体内药物分析旨在通过各种分析手段,了解药物在体内的数量与质量变化获得药物代谢动力学的各种参数和信息,从药品生产、临床医疗、实验研究等方面对所研究药物作出估计和评价与常规药物分析相比,体内药物分析具有干扰杂质多、样品量少且浓度变化大,不能再度获得完全相同的样品、有时要求较快提供结果、要有一定的仪器设备、工作量大等特点必做影响血药浓度的因素有哪些?答包括机体因素生理(年龄、性别、妊娠)、病理、遗传;药物因素剂型因素、手性药物对映体相互作用;环境因素化学物质、合并用药;人体昼夜节律、营养和精神状态必做为什么要进行体内药物分析?体内药物分析的主要任务是什么?答为开展临床药学和临床药理学研究服务,以指导临床安全、合理、有效用药和正确评价新药体内药分的主要任务分析方法学的研究、治疗药物监测、药代动力学研究、人群代谢分型研究、体内内源性物质的测定及其它方面(药物滥用、吸毒、兴奋剂检测、法医毒物分析等)的应用必做2药物进入体内后一般需经历哪些物理、化学变化?这些变化与药理作用的关系如何?答物理变化——系指药物与生物大分子如血浆蛋白的结合反应化学变化——系指药物的代谢反应,包括一相代谢(氧化、还原、水解反应)和二相代谢反应(各种结合反应)由于药物的作用强度与血液中游离药物的浓度密切相关,同时药物经代谢后活性发生了变化,故药物的物理、化学变化与药理作用密切有关必做药物在体内的代谢反应有哪些类型?必做3常用生物样本有哪些?如何采集、储存答常用生物样本有血样(血浆、血清和全血)、尿样、唾液采集与储存血浆——全血加抗凝剂,离心,取上清液;血清——全血离心,取上清液采血后必须尽快离心分离出血浆或血清,置-20℃以下冷冻保存尿样——收集服药后一定时间内尿样,记录体积,混合均匀后取一定量测定尿中药物浓度,计算一定时间内尿中药物的累积量唾液——漱口15分钟后收集口内自然流出或经舌在口内搅动后流出的混合唾液,离心后取上清液样本采集后不能及时测定,可置4℃冷藏,若放置时间较长,则需-20℃~-80℃冷冻保存必做生物样品测定前为什么要除去蛋白质?除去蛋白质的常用方法有哪些?答除蛋白质的意义使结合型药物释放出来,以测定总浓度得到较“干净”的提取液,减少乳化消除对测定的干扰常用去蛋白质方法蛋白质沉淀法——生成不溶性盐或盐析和脱水作用包括加酸类、重金属盐、中性盐和能与水混溶的有机溶剂等,如三氯乙酸、高氯酸、Cu2+、硫酸铵、甲醇、乙腈等组织酶消化法——蛋白水解酶,如胰蛋白酶、胃蛋白酶等必做影响液-液提取和液-固提取效率的因素分别有哪些?必做影响液-液提取的因素有:水相pH提取溶剂离子强度影响液-固提取的主要因素有:固定相洗脱液流速样品装载量4评价分析方法的效能指标包括哪些项目?如何求算?必做试述体内药物分析方法设定的一般步骤答首先进行文献查阅,设计方案,然后通过实验加以验证一般实验步骤如下以纯品进行测定——选择最佳测定条件(线性,灵敏度、pH、检测波长等)空白样品测定——按设定的方法进行前处理和测定,考察空白值的大小和干扰程度以水代替空白样品,添加标准品后测定,以获得提取回收率的大致情况,从而对前处理中各步操作条件进行选择空白样品中添加标准后测定——求样品回收率,建立标准曲线等体内实样测定——根据实样测定结果来判断设定的方法是否合理、可行以上步骤需要反复试验以获得最佳实验条件必做阐述定量限与检测限的定义、区别及表示方法答定量限——即定量下限(LLOQ),表示药物可定量测定的最低量,须符合一定精密度和准确度要求,常以标准曲线最低浓度点来确定,或以S/N=5~10确定检测限(LOD)——表示药物的最低可测度,不必定量,通常以信噪比(S/N)=2~3时被测药物的绝对量表示;两者的区别主要在于是否有定量要求LOD没有定量要求,而LLOQ则有定量要求必做体内药物分析方法有哪些?各有何优缺点?答体内药物分析方法可分为三大类光谱法——包括比色法、紫外法和荧光法方法优点是操作简便、快速,所需设备简单其缺点是不具备分离功能,选择性较差,对前处理要求高;比色法和紫外法灵敏度较低免疫法——包括放射免疫、酶免疫、荧光免疫等方法优点是灵敏、专属,操作简便、快速,对样品预处理要求不高其缺点是精密度较差,需要试剂盒和专属仪器色谱分析法——包括HPLCGCLC/MSGC/MS等方法优点是具有分离分析功能,是评价其它方法的参比方法必做5紫外法消除干扰的方法有哪些?说明原理和应用条件P82必做
1.差示分光光度法
(1)利用最大吸收波长进行测定
(2)利用最小吸收波长处的增色效应进行测定
(3)利用最大吸收与最小吸收之差(即振幅)进行测定
2.双波长测定法如何进行激发光谱和荧光光谱的测定?P91页必做荧光物质吸收紫外光后被激发出荧光,如果将激发荧光的光源用单色器使其分光后,测定在每一波长的激发光照射下,物质所发射的荧光,以荧光强度对激光光波长作图,得到荧光物质的激光光谱,实际上,激发光谱就是荧光物质的吸收光谱激发光谱中最高峰的波长,能使荧光物质发出最强烈的荧光如果使激发光的波长和强度保持不变,而让物质所发生的荧光通过单色器色散,依次将不同波长的荧光照射于接收器上,并依次测其荧光强度,然后以荧光强度对相应的荧光波长作图,得到该物质的荧光发射光谱,简称荧光光谱6免疫分析的基本原理、基本条件是什么?答基本原理即抗原-抗体结合反应在反应体系中,当抗体(Ab)量一定时,抗原(Ag)与标记抗原(Ag*)就与抗体发生竞争性结合反应,生成的[Ag*-Ab]与[Ag]的量呈负相关,这种特异的竞争性抑制的数量关系是免疫分析的定量基础基本条件是特异性抗体、标记抗原、未标记抗原(即标准品)必做常用免疫分析有哪几种?相互间区别在哪些方面?答常用免疫分析有放射免疫法、酶免疫法、荧光免疫法、化学发光免疫法等,它们的主要区别在于标记物不同,由此采用的测定方法也不同必做在RIA中,结合物与游离标记物的分离方法有哪些?必做7气相色谱仪最常用检测器是什么?有何特点?适用范围?必做GC法定量方法与内标选择原则?答对内标物的要求内标物必须是样品中不含有的组分,其保留时间应与待测物tR值相近,但R≥
1.5,并具有足够的纯度内标物选择原则内标与被测物相差一个化学元素;或内标与被测物为同系物;或内标与被测物结构相似,或内标与被测物理化性质相似必做什么是正相色谱?什么是反相色谱?必做说明RP-HPLC法的常用固定相、流动相、适用范围,及流动相中甲醇等有机溶剂浓度变化对被测组分保留时间的影响答常用固定相——ODS(C18)柱;流动相——甲醇-水、乙腈-水、四氢呋喃-水;适用范围——非极性至中等极性的各类分子型化合物;流动相中甲醇等有机溶剂浓度增大,被测组分保留时间缩短必做HPLC仪常用检测器有哪些?指出各种检测器的适用范围和适用注意点答常用检测器有紫外、二极管阵列、荧光、蒸发光散射、电化学、质谱等紫外检测器——通用型检测器,适合具有紫外吸收的各种物质的检测二极管阵列检测器——具有光谱、色谱和三维图谱,可以进行定性和定量分析,以及色谱峰纯度检查荧光检测器——专属检测器,适合具有荧光或潜在荧光物质的检测,灵敏度高蒸发光散射检测器——适合于无紫外吸收物质的检测,要求流动相必须是挥发性的,不能含有非挥发性的缓冲盐电化学检测器——适合于具有氧化还原性质的物质,要求流动相必须有一定的电导率,一般为盐类、有机溶剂和水的混合物质谱检测器——具有定性定量功能和高的灵敏度必做8什么是手性药物?为什么要研究手性药物?必做常用手性色谱方法有哪些?答分子结构中含有不对称碳原子(即手性中心)的药物称为手性药物因手性药物两对映体在体内的生物活性有差异,包括药效学差异(竞争拮抗等)和药动学差异(吸收、分布、代谢、排泄)为正确评价两对映体的作用和进行对映体药物的质量控制,所以要研究手性药物常用手性HPLC法有手性衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法必做9毛细管电泳有哪几种分离模式?毛细管电泳分离模式有毛细管区带电泳,胶束电动色谱,毛细管凝胶色谱,毛细管等电聚焦,毛细管等速电泳,移动界面毛细管电色谱必做10常用联用技术有哪些?常用联用技术有LC-MS,GC-MS,GC-GC,HPLC-HPLC,GC-HPLC,免疫分析-HPLC等必做
二、名词解释第X章题目要求1TDM答治疗药物监测,为英文“therapeuticdrugmonitoring”的缩写必做2一相代谢答指药物在体内发生的氧化反应、还原反应、水解反应必做二相代谢答指药物在体内的结合反应,包括葡萄糖醛酸结合、硫酸酯化、甲基化、乙酰基化、氨基酸缀合、谷胱甘肽缀合等必做生物转化答主要指体内代谢反应必做CYP1A2答细胞色素P4501族A亚族第2个酶基因必做3血清答全血经离心后的上清液必做血浆答全血加抗凝剂(肝素等),经离心后的上清液必做4RSD答相对标准偏差,即精密度的一种表示方法必做检测限答表示药物的最低可测度,不必定量,通常以S/N=2~3倍时被测药物的绝对量表示必做定量限答表示药物可定量测定的最低量,须符合一定精密度和准确度要求,常以标准曲线最低浓度点来确定,或以S/N=5~10确定必做提取回收率答指药物加入到生物样本中经前处理后测得的量与理论加入量的比值必做5荧光光谱答以发射波长为横坐标,荧光强度为纵坐标所作的图必做激发光谱答以激发波长为横坐标,荧光强度为纵坐标所作的图必做6酶免疫分析答酶免疫分析是在放射免疫分析基础上发展起来的一种免疫分析方法,以酶代替同位素来标记药物,酶与底物、辅酶等反应后引起吸收光谱变化而被检测必做7反相HPLC答即流动相极性大于固定相极性的HPLC必做ODS答即十八烷基硅烷键合硅胶,为常用反相HPLC的固定相必做
三、填充题第X章题目要求1体内药物分析的特点干扰杂质多,样品量少浓度低,不能再度获得完全相同的样品,B要有一定的仪器设备、工作量大等必做影响血药浓度的因素有机体因素(生理因素、遗传因素、病理因素)、药物因素(剂型、手性药物相互作用)、环境因素(药酶诱导剂、抑制剂、大气污染、饮食)等必做2药物在体内发生的物理变化和化学变化分别是指和必做3常用生物样品有血样(血浆、血清、全血),尿样,唾液等必做常用去蛋白的方法有蛋白质沉淀法(加蛋白质沉淀剂,如三氯乙酸,高氯酸,Zn2+,Cu2+,硫酸铵,氯化钠,甲醇,乙腈,丙酮等)和组织酶消化法(加蛋白水解酶如胃蛋白酶,胰蛋白酶,枯草菌溶素等)必做生物样品中药物与代谢物的提取方法有液-液提取和液-固提取等必做影响液-液提取的因素有水相pH值、提取溶剂和离子强度等必做4分析方法认证的主要指标线性范围、准确度、精密度、专属性、灵敏度、稳定性等必做体内药物分析方法包括光谱法(比色、紫外、荧光),色谱法(HPLC、GC、GC-MS、LC-MS),免疫分析法(放射免疫、酶免疫、荧光免疫)等必做5紫外光谱法消除干扰的方法有差示光谱法、导数光谱法、双波长法等必做6在放射免疫分析中,结合物与游离标记物的分离方法有沉淀法、吸附法、固相法、差速迁移法、双抗体法必做7气相色谱法中常用的检测器有氢焰离子化检测器、氮磷检测器、电子捕获检测器、MS等必做液相色谱中常用检测器有紫外检测器(可变波长、二极管阵列)、荧光检测器、电化学检测器、蒸发光散射检测器、MS等必做反相HPLC法常用流动相有甲醇-水,乙腈-水,四氢呋喃-水必做8手性HPLC法常用测定方法有手性试剂衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法必做9在毛细管电泳中,驱动荷电物质前进的两个重要作用力是电泳流和电渗流必做
四、单选题第X章题目要求1尿中异烟肼及乙酰异烟肼的比色测定是利用(B)专属反应(KCN-氯胺T反应)A异烟肼B乙酰异烟肼C异烟肼及乙酰异烟肼D异烟腙E异烟酸必做药理作用强度与下列哪一项最相关(C)A血液浓度B摄入量C血液中游离药物的浓度D与蛋白结合药物的浓度E血药总浓度必做2引起药物氧化代谢的主要酶是(D)A氧化酶B硫酸酯酶C脱氢酶D细胞色素P450E葡醛酸转移酶必做属于药物二相代谢酶的是(E)A氧化酶B酯酶C脱氢酶D细胞色素P450E葡醛酸转移酶必做3欲提取尿中某一碱性药物,其pKa为
7.8,要使
99.9%的药物能被有机溶剂提取,尿样pH应调节到(D)A.
5.8B.
9.8C.
4.8以下D.
10.8或
10.8以上E.
7.8-
9.8必做4表示生物样品测定方法准确度的是(E)A检测限B定量限C精密度D线性范围E回收率必做表示生物介质中药物最低可测度的是(A)A检测限B定量限C线性范围D最低检测浓度E可信限必做方法的专属性也称选择性,在体内药物分析中主要考察(E)A相关物质B内标物C共存杂质D降解物E内源性物质必做表示样品中含有其他共存物质时该法能定量测定被测物的能力的是(D)A方法的精密度B方法的准确性C方法的相关性D方法的选择性E方法的线性范围必做5以发射波长对荧光强度所作的图称为(E)A激发光谱B照射光谱C紫外发射光谱 D吸收光谱E荧光光谱(发射光谱)必做6放射免疫法与荧光免疫法的区别在于( D )A抗体不同B亲和力不同C标准抗原不同D标记物不同E原理不同必做7高效液相中流动相极性大于固定相的称为(A)A.RP-HPLCB.HPTLCC.NP-HPLCD.LLPCE.HPCE必做一般键合相色谱的使用pH范围为(E)A3~9B2~9C2~7D3~8E2~8必做高效液相中流动相极性大于固定相的称为(A)A.RP-HPLCB.HPTLCC.NP-HPLCD.LLPCE.HPCE必做
五、多选题第X章题目要求1体内药物分析的任务包括(ABCD).A分析方法的研究 B血药浓度监测 C药动学研究 D体内内源性物质测定E新药质量标准研究必做2药物二相代谢物——缀合物(结合物)的水解方法有(ACD)A酸水解B碱水解C溶剂解D酶水解E离子对法必做测定血浆蛋白结合率的常用方法(AB)A、平衡透析法B、超滤法C、酶法D、衍生化法E、反相色谱法必做药物在体内的一相代谢包括(AC)A氧化反应B甲基化反应C水解反应D缀合反应E与大分子结合反应必做3影响液-液提取的因素有ABCA水相pHB提取溶剂C离子强度D流速E装样量必做影响液-固提取的主要因素有CDEA水相pHB提取溶剂C固定相D洗脱液流速E样品装载量必做4体内药物分析方法的专属性主要考察(BDE)A辅料B共服药C有关物质D内源性杂质E代谢物必做5紫外分光光度法中消除干扰的方法有(ABE)A差示分光光度法B导数光谱法C二极管阵列法D化学发光法E双波长法必做6RIA中分离结合与游离标记物的方法有(ACDE)A双抗体法BLC/MS法C吸附法D固相法E沉淀法必做抗血清的鉴定指标(BCD)A吸光强度 B特异性C活度 D滴度E放射性强度必做免疫分析中基本试剂包括(ADE)A特异性抗体B分离试剂C免疫原D标准抗原E标记抗原必做7气相色谱中常用流动相为(CDE)A甲醇-水B乙腈-水C氦气D氮气E氢气必做在HPLC法中常用来调节流动相pH的酸碱是(ABDE)A枸橼酸B稀醋酸C稀硫酸D三乙胺E磷酸盐必做10气-质联用仪中接口的作用是(BC)A连接作用B使压力匹配C组分浓缩D检测器作用E电离作用必做。