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过敏原特异性抗体IgEELISA检测试剂盒说明书【用途】定性和定量检测过敏原特异性人IgE过敏反应是一种特殊的病理性免疫反应,是人体对一种或多种原本无害的物质产生不正常的反应其主要原因是患者吸入或食入含有过敏性物体__机体,触发细胞大量分泌药理活性物质,引起一系列过敏症状,例如过敏性哮喘,过敏性鼻炎,湿疹、发痒、流泪、皮炎以及肠胃道过敏症等同时产生相当量的E型免疫球蛋白(ImmunoglobulinE即IgE),引起人类过敏反应的过敏原种类繁多,如能从中查到引起机体过敏的物质,就能很好地预防和治疗过敏反应本检测盒是一种用酶联免疫法(ELISA)快速、精确测定体内引起过敏反应的特异E型免疫球蛋白的体外诊断工具它可定性和定量地测定人体抗特种过敏原的E型免疫球蛋白在血清中的水平,从而帮助医生正确地诊断引起病人过敏反应的过敏原本过敏原检测盒适合于广泛的过敏原检测,特别适用于少儿患者,同时也非常适用于湿疹以及其他皮肤病患者和对皮试过敏的患者【检测原理】本试剂盒采用酶免ELISA法当具有过敏抗原固化于表面的载体与病人血清培养在一起后,血清中特异性IgE(一抗)就会特异地结合到抗原上,此特异结合的抗体可被酶联的二抗所识别,加入显色剂后,二抗所联的酶使显色剂呈蓝色,加终止液后呈黄色显色的深度与血清中特异性IgE成正比;能定性/半定量地检测血清中特异性IgE的浓度【检测盒组成】过敏原包被微孔酶标板CoatedWells96wellsHRP酶联二抗12ml浓缩洗涤液15XWashingConc.40ml×1TMB单组分显色液12ml硫酸终止液StopSolution12ml样本稀释液SampleDiluent12ml【检测动态范围】
0.35~100IU/ml
0.84ng~240ng/ml【重现性】CV10%~15%【重现性】
0.30IU/ml
0.72ng/ml【注意事项】
1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃使用后立即冷藏保存试剂
2.洗板不正确可以导致不准确的结果在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体操作过程中也不要让微孔完全干燥
3.消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果
6.在储存和温育时避免强光直接照射
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性
9.不能使用过期产品
10.如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置
11.每一份样本,在塑料框架上安置一条过敏原包被微孔酶标板条,并用病人姓名或标识号码作为相应的标记每条酶标板的第一个孔为空白孔
12.如果病人血清的所有孔的OD值
0.2,应将该病人血清标本用样品稀释液适当稀释后重新测定【保存】贮藏于2-8C【准备工作】洗涤缓冲液检测开始前,根据需求量,将浓洗涤缓冲液(15X)稀释15倍,即取一份(一体积的浓洗涤缓冲液(15X)加入14份蒸馏水中,混匀后,装入一挤压式洗瓶备用【检测步骤】
1、将所有试剂平衡至室温(20-25℃)
2、在总IgE孔和特异性过敏原孔中分别加入100ul血清,轻轻混匀10秒,37C温育45分钟
3、洗板倒尽板内液体,每孔加入250µl稀清洗液洗涤酶标板,然后倒尽液体,再加入250µl洗涤液,倒尽液体,如此反复洗涤5次,最后将酶标板翻扣在厚叠吸水纸上拍干
4、在所有孔中加入100ulHRP酶联二抗(绿色),37C温育45分钟
5、洗板重复步骤3操作
6、在所有反应孔中加入100µlTMB底物显色液,置室避光反应25-30分钟
7、在所有反应孔中加入100µl终止液
8、使用标准酶标仪在450__波长下,测每孔的OD值【Cut-off值】Cut-off值
0.15+空白孔OD值(均值)【结果判断】阴性和阳性判断
(1)cut-off值±10%的范围区间为分区
(2)以cut-off值90%为阴性
(3)以cut-off值110%为阳性致敏程度定量分级根据FEIA和RAST的测定结果,国际上特异性IgE和定级标准关系为特异性IgE含量IU/ml(OD值)定级标准
0.35(
0.15)0(阴性)
0.35-
0.70(
0.15-
0.35)1(弱阳性)
0.70-
3.50(
0.35-
1.00)2(阳性)
3.50-
17.50(
1.00-
2.00)3(强阳性)
17.50-
50.0(
2.00-
2.50)4(较强阳性)
50.0-
100.0(
2.50-
3.00)5(特强阳性)。