牛白细胞介素6IL-6酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围96T

牛白细胞介素6IL-6酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围:96T

0.5ng/L-17ng/L使用目的本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素6IL-6含量实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛白细胞介素6IL-6水平用纯化的牛白细胞介素6IL-6抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素6IL-6,再与HRP标记的白细胞介素6IL-6抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样品中的白细胞介素6IL-6呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度OD值，通过标准曲线计算样品中牛白细胞介素6IL-6浓度试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml X1瓶7终止液6ml X1瓶2酶标试剂6ml义1瓶8标准品32ng/L

0.5mlXl瓶3酶标包被板12孔8条9标准品稀释液

1.5mlXlM4样品稀释液6m1X1瓶10说明书1份5显色剂A液6mixi瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml X1/瓶12密封袋_____________1个_______标本要求

1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验若不能马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的HRP活性操作步骤

1.标准品的稀释本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释16ng/L5号标准品1503的原倍标准品加入1503标准品稀释液8ng/L4号标准品150Hl的5号标准品加入150川标准品稀释液4ng/L3号标准品1503的4号标准品加入150川标准品稀释液2ng/L2号标准品1503的3号标准品加入1503标准品稀释液1ng/L1号标准品1503的2号标准品加入1503标准品稀释液

2.加样分别设空白孔空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同、标准孔、待测样品孔在酶标包被板上标准品准确加样50pl,待测样品孔中先加样品稀释液40M然后再加待测样品10pl（样品最终稀释度为5倍）加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀

3.温育用封板膜封板后置37C温育30分钟

4.配液将30倍浓缩洗涤液用蒸t留水30倍稀释后备用

5.洗涤小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干

6.加酶每孔加入酶标试剂50pl,空白孔除外

7.温育操作同3o

8.洗涤操作同5o

9.显色每孔先加入显色剂A50pl,再加入显色剂B50pl,轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.终止每孔加终止液50pl,终止反应（此时蓝色立转黄色）

11.测定以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）测定应在加终止液后15分钟以内进行操作程序总结准备试剂，样品和标准品计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标。