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临床基因扩增检验技术PCR上岗证理论考试卷及答案一.填空(每空
0.5分,共15分)
1.为加强医疗机构临床基因扩增实验室规范化管理,卫生部于2010年发布《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》,北京市卫生局为做好实验室备案工作,于2012年发布了《北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室技术审核暂行规定》
2.北京市卫生局及各区县卫生局负责所辖行政区域内地方医疗机构临床基因扩增检验实验室的备案和监督管理工作其中备案的技术审核工作流程主要包括申报《医疗机构执业许可证》、拟设基因扩增检验实验室的设置平面图、实验室负责人简历表、实验室工作人员一览表、拟开展的临床基因扩增检验项目;实验室质量管理程序文件和作业指导书目录;北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室自查/审核表;医疗机构的医学检验科应当设有专业诊疗科目细胞分子遗传学备案的临床基因扩增检验实验室参加医疗机构的年度校验
3.临床基因扩增检测的分析中质量保证关键内容包括室内质量控制和室内质量评价其中前者监测和控制的是实验室测定的精密度,而后者则通过对不同的实验室测定结果的比对而评价实验室测定的准确度
4.在进行荧光定量PCR检测之前,样本手工预处理应该在生物安全柜中进行,并且使用吸头进行样本操作
5.PCR的基本反应过程包括变性、退火、延伸
6.荧光定量PCR使用的Taqman探针两端标记有报告基团和淬灭基团
7.根据遗传中心法则,遗传信息的流动方向为DNA-RNA-蛋白质
8.普通临床基因扩增检验实验室一般包括下面四个分区试剂储存和准备区;标本制备区;扩增区;扩增产物分析区
9.提纯的核酸样品可根据A260nm波长的光吸收值算出其含量,通过计算A260nm/A280m的比值计算出其纯度
10.临床基因扩增实验室检测用的试剂应当经NMPA批准
11.cfDNA的中文名称是循环游离DNA,ctDNA的中文名称是循环肿瘤DNA二.是非题(在你认为正确的句子后面打J,错误的后面打X,每题1分,)(15分)
1.DNA双链中,碱基A-T之间以两个氢键相连,G-C以三个氢键相连(J)
2.DNA变性是指在物理或化学因素的作用下,导致两条DNA链之间的氢键断裂,而核酸分子中的所有共价键同时不受影响(J)
3.自制室内质控品时,应对质控品的均匀性和稳定性进行评价(J)
4.定量PCR与定性PCR测定原理的最主要的区别点在于前者测定点为扩增平台期,而后者的测定点在PCR的指数扩增期(V)
5.处理PCR标本时,在没有生物安全柜的情况下,可用超净台操作(X)
6.临床检验中的系统误差通常表现为室内质控品测定结果的SD增大(X)
7.扩增管没有盖好会造成PCR反应液热蒸发,直接影响结果,而且会成为一个污染源(V)
8.核酸是极性化合物,不溶于水,可溶于乙醇等有机溶剂(J)
9.质量体系文件中应包括质量方针、质量目标和质量指标(X)
10.无法参加室间质量评价计划时,应进行室间比对,不可以用室内质控替代(X)
11.核酸的解链温度(Tm)与G+C含量有关,G+C含量愈大,Tm(解链温度)愈低(X)
12.PCR反应中,复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成(V)
13.核酸的复制是由3,-5,方向进行的(X)
14.PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高(J)
15.PCR可应用于遗传病、肿瘤、病原体检测及判断亲缘关系等方面(J)三.单选题(请将所选答案填写在题后的括号中每题1分,共25分)
1.PCR技术的发明人是(A)A.Kary MullisB.Crick F.H.C.C.WatsonJ.D.D.Rosalind Franklin.
2.生物安全水平的级别共分为几个等级(D)A.1个B.2个C.3个D.4个
3.有关于荧光定量PCR方法,下述哪一条是错误的?(A)A.在扩增的指数期定量;B.采用内标和外标方法均可;C.可采用Taqman探针;D.在扩增的终点测定定量
4.在选择开展临床检验项目时,应首先考虑(A)A.临床有效性和分析有效性;B.检测精密度和检测准确度;C.临床有效性和检测精密度;D.分析有效性和检测准确度5以下哪项有利于DNA的保存(C)A.溶于pH
3.0溶液B.加入少量RNaseC.加入EDTA螯合钙离子,去除核酸酶的活性D.加入少量DNase
6.荧光定量PCR检测过程中,基线漂移的可能原因有(D)A.蒸发;B.探针水解C.相邻荧光通道干扰D.以上都是
7.将基因扩增检验实验室的产物分析区设置为负压状态,目的是(C)A.防止该区灰尘的逸出;B.为了生物安全的目的;C.防止扩增产物从该区逸出;D.防止有生物传染危险的样本逸出;
8.真核生物染色体DNA主要以下列哪种形式存在()A环状单链分子B线性单链分子C环状双链分子D线性双链分子
9.TaqMan探针采用的是(C)A.同位素标记的探针B.YBR Green荧光染料C.荧光标记的探针D.生物素标记的探针
10.最大量程为200ul的微量移液器,显示读数为020,实际的吸液容量值为(B)A.200ul B.20ul C.2ulD.
0.2ul
11.有关核小体的错误叙述是(D)A.核小体是染色体的基本单位B.DNA和组蛋白共同构成核小体C.DNA和组蛋白Hl构成核小体连接区D.RNA和组蛋白共同构成核小体
12.基因突变的实质是(A)A.染色体上的DNA变成了RNAB.染色体上的DNA序列变化了C.染色体上的DNA高级结构发生了局部改变D.染色体上的DNA变成了蛋白质
13.如果一个PCR反应体系中加入模板200个,经过30个循环后扩增产物的数量将达到(B)232A.200X30B.200X2℃.200X30X2D.200X
3014.双链DNA中的碱基对有(B)A.A-UB.G-C C.A-C D.G-A
15.下列四个DNA片段中含有回文结构的是(D)A.GAAACTGCTTTGACB.GAAACTGGAAACTGC.GAAACTGGTCAAAGD.GAAACTGCAGTTTC
16.核酸分子中储存遗传信息的关键部分是(D)A.MrnaB.TrnaC.rRNAD.DNA
17.核酸检测探针的标志性特征是(A)A.一小段已知序列的单链核酸;B.一小段未知序列的单链核酸;C.一小段已知序列的双链核酸;D.有同位素或非同位素标记物
18.PCR技术扩增DNA,需要的条件是(A)
①目的基因
②引物
③四种脱氧核昔酸
④DNA聚合酶等
⑤mRNA
⑥核糖体A.
①②③④B.
②③④⑤C.
①③④⑤D.
①②③⑥
19.多重PCR需要的引物对为(D)人.一对引物氏半对引物两对引物.多对引物
20.以下在PCR反应中,对扩增产物的特异性起决定因素为(B)A.模板B.引物C.dNTPD.镁离子
21.Taq DNA聚合酶酶促反应最快最适温度为(C)A.35-40℃B.50-55℃C.70-75℃D.80-85℃
22.以下哪项不是临床PCR实验室设计的一般原则(A)A.各区合并B.注意风向C.因地制宜D.方便工作
23.下列哪一种病毒的遗传物质为RNA(DE)A.乙肝病毒B.人乳头瘤病毒C.巨细胞病毒D.人类免疫缺陷病毒E.新型冠状病毒
24.在做结核分枝杆菌-荧光PCR检测之前,应采用下面哪个浓度的氢氧化钠对痰液标本进行液化(C)A.2%B.3%C.4%D.5%
25.普通PCR基因扩增仪最关键的部分是(B)A.热盖B.温度控制系统C.软件系统D.荧光检测系统四.简答题(每题5分,共25分)L感染性疾病的定量、定性检测,人基因组的基因型检测,对上述三类PCR检测的室内质控品的浓度水平和型别如何要求?(5分)答定量PCR检测的室内质控品的浓度,测定线性范围内的高、中、低三种浓度,型别,生物DNA/RNA参考标准品、定性PCR检测的室内质控品的浓度、接近方法测定下限、2-4倍的浓度,型别,生物DNA参考标准品,人基因组的基因型检测的室内质控品的浓度、型别、人类基因组DNA参考标准品
2.简述什么情况下应该对分子诊断检验程序进行性能验证?(5分)答:⑴在常规应用前、应由实验室对未加修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证⑵任何严重影响检测系统分析性能的情况发生后、如仪器搬迁、设施、环境严重失控等⑶常规使用期间,定期做⑷启用新的检测系统,更换试剂、仪器、校准品溯源性改变
3.临床PCR实验室质量管理体系文件应包含哪些内容?(5分)答⑴《质量手册》质量方针和质量目标的声明⑵准则要求的程序和记录⑶实验室规定的文件和记录,为确保有效策划、运行并控制其过程⑷适用的法规、标准及其它规范文件
4.简述生物安全的概念、实验室生物安全水平的概念(5分)答实验室生物安全、为了避免微生物和医学实验室中有害或有潜在危害的生物因子对人、环境和社会造成的危害或潜在危害,而采取的防护措施、硬件、和管理措施软件,达到对人、环境和社会的安全防护目的生物安全水平,根据实验室的工作性质及可能分离到的病原体等级进行安全防护水平的划分
5.可用哪些方法对分子诊断实验室的员工进行技术工作能力评估(至少列出5种)(5分)答⑴培训所涉及的范围仪器设备的使用、维护和校准、试剂法原理、质量管理体系、相关法律法规、相关领域的新技术、新理念和新进展、实验操作技能等⑵如何培训讲座、讨论、自学和参加培训班⑶培训的评估、书面考试、实验考核、讨论心得、论文、综述等五.论述题(共20分)
1.某一开展乙肝DNA定性检测的临床PCR实验室,参加盲样测试(包括三个阳性样本,两个阴性样本),该实验室做出的结果为5份样本全部阳性,工作人员将盲样全部阳性的结果确认后立即发出第二天发现当天的室内质控结果也是全部阳性,并且当天的阳性率明显增高请回答
(1)这样做是否正确?(4分);
(2)应该如何处理?(8分)
(3)分析该情况产生的所有可能原因?(8分)⑴答不正确⑵答查找分析结果异常原因⑶答
①扩增产物的污染
②临床标本的孩酸提取过程中发生的样本间的交叉污染
③喷枪等关键耗材污染
④试剂污染
⑤仪器故障。