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实验室常用试剂、缓冲液的配制1MTris-HCIpH
7.
47.
68.0组份浓度1MTris-HCI配制量1L配制方法
1.称量
121.1gTris置于1L烧杯中.参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.按下表量参加浓盐酸调节所需要的pH值.将溶液定容至1Lo.高温高压灭菌后,室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃溶液的pH值大约降低
0.03个单位
1.5MTris-HCIpH
8.8组份浓度
1.5MTris-HCI配制量1L配制方法
1.称量
181.7gTris置于1L烧杯中.参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.用浓盐酸调节pH值至
8.
8..将溶液定容至1Lo.高温高压灭菌后,室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃溶液的pH值大约降低
0.03个单位10xTEBufferpH
7.
47.
68.0组份浓度100mMTris-HCI10mMEDTA配制量1L配制方法
1.量取以下溶液,置于1L烧杯中.向烧杯中参加约800ml的去离子水,均匀混合.将溶液定容至1L后,高温高压灭菌.室温保存3M醋酸钠pH
5.23M赭酸钠100ml.称・
40.8gNaOAc-3H2置于100~20ml烧杯中,加入约40ml的去离子水搅拌溶解..加入冰晶酸调节pH值至
5.
2..加去离子水将溶液定容至100ml..高温总压天葡后室温保存~mMKCI10mMNa2HPO42mMKH2PO4配制量1L配制方法
1.称量以下试剂,置于1L烧杯中
2.向烧杯中参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.滴加浓盐酸将pH值调节至
7.4然后参加去离子水将溶液定容至1L.高温高压灭菌后,室温保存.参加40ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50ml.用
0.22mm过滤膜过滤除菌4小份分装(1ml/份)后,-20C保存IPTG(24mg/ml)组份浓度24mg/mlIPTG配制量50ml配制方法.称量
1.2gIPTG置于50ml离心管中.参加40ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL.用
0.22mm过谑膜过滤除菌.小份分装(1ml/份)后,-20C保存X-Gal(20mg/ml)组份浓度20mg/mlX-Gal配制量50ml配制方法1•称量1gX・Gal置于50ml圈心管中.加入40mlDMF(二甲基甲酰胺)充分混合溶解后,定容至50mL.小份分装(1ml/份)后,-20℃避光保存组份浓度1%W/VTryptone
0.5%W/VYeastExtract1%W/VNaCI配制量1L的去离子水,充分搅拌溶解.滴加5NNaOH(约
0.2ml)调节pH值至
7.
0.加去离子水将培养基定容至1Lo.高温高压灭菌后,冷却至室温.参加1mlAmpicillin(100mg/ml)后均匀混合.4c保存组份浓度配制量1L配制方法.配制磷酸盐缓冲液(
0.17MKH2P
040.72MK2HPO4)100ml.溶解
2.31gKH2PO4和
12.54gK2HP04于90ml的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100ml高温高压灭菌.称取以下试剂,置于1L烧杯中.参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解..加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌.待溶液冷却至60c以下时,参加100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液.4℃保存组份浓度配制量1L配制方法组份浓度配制量1L配制方法.配制250mMKC1溶液在90ml的去离子水中溶解
1.86gKC1后,定容至100ml.配制2MMgC12溶液在90ml去离子水中溶解19gMgC12后定容至100ml高温高压灭菌.称取以下试剂,置于1L烧杯中.参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.量取10ml250mMKC1溶液,参加到烧杯中.滴加5NNaOH溶液约
0.2ml调节pH值至
7.
0.参加去离子水将培养基定容至1Lo.高温高压灭菌后,4℃保存.使用前参加5ml灭菌的2MMgCb溶液组份浓度配制量100ml配制方法.配制1M葡萄糖溶液将18g葡箱糖溶于90ml去离子水中,充分溶解后定容至100ml用
0.22mm滤膜过滤除菌.向100mlSOB培养基中参加除菌的1M葡萄糖溶液2ml均匀混合.4℃保存组份浓度
1.6%W/VTryptone1%W/VYeastExtract
0.5°oW/VNaCI配制量1L配制方法
1.称取下列试剂置于1L烧杯中组份浓度解Tryptone1%W/VYeasfExtract
0.5s©W/VNaCI配制量1L配制方法
1.称取下列试剂置于1L烧杯中组份浓度TW0ne16gYeastExtract10g配制量1LNaCI5g.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解3滴加5NNaOH调节pH值至
7.
0..加去离子水将士吾养基定容至1L..高温高压灭盘后,4c保存a配制方法
1.称取以下试剂,置于1L烧杯中.参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.滴加5NNaOH约
0.2ml调节pH值至
7.
0.加去离子水将培养基定容至1Lo.高温高压灭菌后,4℃保存组份浓度配制方法NZYM培养基除不含CasaminAcid酪蛋白氨基酸外,其他成份与NZCYM培养基一样组份浓度配制方法NZM培养基除不含YeastExtract酵母提取物外,其他成份与NZYM培养基一样.按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,参加以下试剂中的一种.高温高压灭菌后,戴上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀此时培养基温度很高,小心烫伤.待培养基冷却至50〜60℃时,参加热不稳定物质如抗生素等,摇动容器充分混匀组份浓度配制量1L配制方法
1.称取以下试剂,置于1L烧杯中.参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.滴加5NNaOH约
0.2ml调节pH值至
7.
0.加去离子水将培养基定容至1L后,参加15gAgar.高温高压灭菌后,冷却至60C左右.参加1mlAmpicillin100mg/ml1mlIPTG24mg/ml、2mlX-Gal20mg/ml后均匀混合4℃避光保存组份浓度配制量1L配制方法.配制磷酸盐缓冲液
0.17MKH2P
040.72MK2HP04100ml溶解
2.31gKH2P04和
12.54gK2HP04于90ml的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100ml高温高压灭菌.称取以下试剂,置于1L烧杯中.参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.加去离子水将培养基定容至1L后,参加15gAgar.高温高压灭菌后,冷却至60c左右.参加100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mlAmpicillin100mg/ml.1mlIPTG24mg/ml2mlX-Gal20mg/ml后均匀混合
8.4c避光保存注意上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCI2和
0.5mMMgCI2»10M醋酸铉组份浓度10M醋酸钱配制量100ml配制方法
1.称量
77.1g醋酸镂置于100〜200ml烧杯中,参加约30ml的去离子水搅拌溶解.加去离子水将溶液定容至100ml.使用
0.22mm滤膜过滤除菌.密封瓶口于室温保存注意醋酸镂受热易分解.,所以不能高温高压灭菌Tris-HCI平衡苯酚配制方法.使用原料大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸翎便可用于分子生物学实验但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应防止使用同时也应防止使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进展重蒸储除去诸如醍等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进展分子生物学实验.操作注意苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等所有操作均应在通风橱中进展,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇
3.不酚平衡因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进展平衡使其pH值到达
7.8以上,苯酚平衡操作方法如下
①液化苯酚应贮存丁-20C此时的苯酚呈结晶状态从冰柜中取出的苯酚首冼在室温下放置使其到达室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解
②参加羟基哮咻8-Quinolinol至终浓度
0.1%该化合物是一种复原剂、RNA髀的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色,有助于方便识别有机相
③参加等体积的1MTris-HCIpH
8.0使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相
④重复操作步骤
③⑤参加等体积的
0.1MTris-HCIpH
8.0使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相
⑥重复操作步骤
⑤,稍微残留局部上层水相
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于
7.
8.
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4c避光保存苯酚/氯仿/异戊醇
25241.说明从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇25:24:1氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的别离,而异戊醇那么有助于消除抽提过程中出现的气泡.配制方法将Tris-HCI平衡苯酚与等体枳的氯仿/异戊醇24:1混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4c保存10%W/VSDS2NNaOH组份浓度2NNaOH配制最100ml配制方法.量取80ml去离子水置于100〜200ml塑料烧杯中NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻陶烧杯炸裂o.称取8gNaOH小心地逐渐参加到烧杯中,边加边搅拌.待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液定容至100ml.将溶液转移至塑料容器中后,室温保存
2.5NHCI组份浓度
2.5NHCI配制量100ml配制方法
1.在
78.4ml的去离子水中参加
21.6ml的浓盐酸
11.6N均匀混合
2.室温保存5MNaCI组份浓度5MNaCI配制量1L配制方法
1.称取
292.2gNaCI置于1L烧杯中,参加约800ml的去离子水后搅拌溶解.加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份.高温高压灭菌后,4℃保存20%W/VGlucose组份浓度20%W/VGlucose配制量100ml配制方法.称取20gGlucose置于100〜200ml烧杯中,参加约80ml的去离子水后,搅拌溶解.加去离子水将溶液定容至100mb.高温高压灭菌后,4c保存Solution1质粒提取用组份浓度25mMTris-HCIpH
8.010mMEDTA50mMGlucose配制量1L配制方法
1.量取以下溶液,置于1L烧杯中.高温高压灭菌后,4c保存.使用前每50ml的Solution1中参加2ml的RNaseA20mg/mlSolution11质粒提取用组份浓度200mMNaOH1%WVSDS配制量500ml配制方法
1.显取下列溶液置于500ml烧杯中10%SDS50ml用2NNaOH50ml组份浓度
2.加灭菌水定容至500ml充分混匀配制量
3.室温保存此溶液保存时间最好不要超过一个月配制方法注意SDS易产生气泡不蓼剧烈搅拌.500ml烧杯中.参加300ml去离子水后搅拌溶解.加去离子水将溶液定容至500ml.高温高压灭菌后,42保存
0.5MEDTApH
8.0组份浓度
0.5MEDTA配制量1L配制方法
1.称取
186.1gNa2EDTA-2H2O置于1L烧杯中.参加约800ml的去离子水,充分搅拌.用NaOH调节pH值至
8.0约20gNaOH注意pH值至
8.0时EDTA才能完全溶解.加去离子水将溶液定容至1L.适量分成小份后,高温高压灭菌.室温保存1MDTT组份浓度1MDTT配制量20ml配制方法
1.称取方09gDTT参加到50ml塑料离心管内.加20ml的
0.01MNaOAcpH
5.2溶解后使用
0.22mm滤膜过滤除菌.适量分成小份后,-20C保存10mMATP组份浓度10mMATP配制量20ml配制方法
1.称取121mgNa2ATP・3H20参加到50ml塑料离心管内.加20ml的25mMTris-HClpH
8.0搅拌溶解.适量分成小份后,-20℃保存组份浓度10mMATP配制量20ml配制方法
1.称取121mgNa2ATP・3H20参加到50ml塑料离心管内.加20ml的25mMTris-HClpH
8.0搅拌溶解
3.适量分成小份后,-20℃保存蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法30%W/VAcrylamide组份浓度30%W/VAcrylamide配制量1L配制方法
1.称量以下试剂,置于1L烧杯中.向烧杯中参加约600nd的去离子水,充分搅拌溶解.加去离子水将溶液定容至1L用
0.45皿n滤膜滤去杂质.于棕色瓶中4℃保存注意丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等聚丙烯酰胺无毒,但也应慎重操作,因为有可能含有少量的未聚合成份40%W/VAcrylamide组份浓度40%W/VAcrylamide配制量1L配制方法
1.称量以下试剂,置于1L烧杯中.向烧杯中参加约600ml的去离子水,充分搅拌溶解.加去离子水将溶液定容至1L用
0.45mm滤膜灌去杂质
4.于棕色瓶中4℃保存注意丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等聚丙烯酰胺无毒,但也应慎重操作,因为有可能含有少量的未聚合成份10%W/V过硫酸核组份浓度10%W/V过硫酸核配制量10ml.称取1g过破酸技.加入10ml的去离子水后搅拌溶解.贮存于4C.注意10%过硬酶核溶液在
4.c保存时可使用2周左右超过期限会失去催化作用BufferSDS-PAGE电泳缓冲液组份浓度
0.125MTris
1.25MGlycine
0.5%W/VSDS配制量1L配制方法
1.称量以下试剂,置于1L烧杯中.参加约800ml的去离子水,搅拌溶解.加去离子水将溶液定容至1L后,室温保存5xSDS・PAGELoadingBuffermL
3.小份500ml/份分装后,于室温保存
4.使用前将25ml的2-ME加到每小份中.参加2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右考马斯亮蓝R-250染液组份浓度
0.1%W/V考马斯亮蓝R-25025%V/V异因醇,10%V/V冰醋酸配制量1L配制方法
1.称取1g考马斯亮蓝R-250置于1L烧杯中.量取250ml的异丙醇参加上述烧杯中,搅拌溶解.参加100ml的冰醋酸,搅拌均匀.参加650ml的去离子水,搅拌均匀.用滤纸除去颗粒物质后,室温保存考马斯亮蓝染色脱色液组份浓度10%V/V醋酸,5%V/V乙醇配制量1L配制方法
1.量取以下溶液,置于1L烧杯中
2.充分混合后使用凝胶固定液SDS・PAGE银氨染色用组份浓度50%V/V甲醉,10%V/V醋酸配制量1L配制方法
1.量取以下溶液,置于1L烧杯中
2.均匀混合后室温保存凝胶处理液SDS-PAGE银氨染色用组份浓度50%V/V甲爵,10%V/V戊二醛
1.量取下列试剂,加入100〜200ml的试剂瓶中,甲醇50ml色液SDS-PAGE银氨戊二姓10mldHaO40ml
0.4%W/VAgN031%V/V2均匀混合后室温保存:刈3川2,
0.04%W/VNaOH100ml
1.量取以下试剂参加100〜200ml的试剂瓶中.均匀混合该溶液应为无色透明状如氨水浓度过低时溶液会呈混浊状,此时应补加浓氨水直至透明.本染色液应现用现配,不宜保存显影液SDS-PAGE银氨染色用组份浓度
0.005%W/V柠檬酸,
0.02%V/V甲醛配制量1L配制方法
1.称量以下试剂,置于1L试剂瓶中.参加1L去离子水后,摇动混合溶解.室温保存核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50xTAEBufferpH
8.5组份浓度2MTris-隔酸,100mMEDTA配制量1L配制方法
1.称量以下试剂,置于1L烧杯中.向烧杯中参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.参力U
57.1ml的醋酸,充分搅拌.加去离子水将溶液定容至1L后,室温保存10xTBEBufferpH
8.
31.称量
41.8gMOPS置于1L烧杯中.加约700mlDEPC处理水,搅拌溶解.使用2NNaOH调节pH值至
7.
0.再向溶液中参加以下试剂.用DEPC处理水将溶液定容至1Lo.用
0.45um滤膜过滤除去杂质.室温避光保存注溶液见光或高温灭菌后会变黄变黄时也可使用,但变黑时不要使用组份浓度10rng/ml澳乙锭配制量100ml配制方法.称量1g澳乙锭,参加到100ml容器中.参加去离子水100ml充分搅拌数小时完全溶解溟乙锭.将溶液转移至棕色瓶中,室温避光保存.澳乙锭的工作浓度为
0.5mg/mlo注意滨乙锭是一种致癌物质,必须小心操作Agarose凝胶.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是
0.5XTBE或1XTAE).根据制胶量及凝胶浓度,准确称量琼脂糖粉,参加适当的锥形瓶中.参加一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)注用「电泳的缓冲液和用f制胶的缓冲液必须统一.在锥形瓶的瓶口封上保鲜膜,并在膜上扎些小孔,然后在微波炉中加热熔化琼脂糖加热过程中,当溶液沸腾后,请戴上防热手套,小心摇动锥形瓶,使琼脂糖充分均匀熔化此操作重复数次,直至琼脂糖完全熔化必须注意,在微波炉中加热时间不宜过长,每次当溶液起泡沸腾时停顿加热,否那么会引起溶液过热暴沸,造成琼脂糖凝胶浓度不准,也会损坏微波炉熔化琼脂糖时,必须保证琼脂糖充分完全熔化,否那么,会造成电泳图像模糊不清.使溶液冷却至60℃左右,如需要可在此时参加滨乙锭溶液(终浓度
0.5mg/ml)并充分混匀注溟乙锭是一种致癌物质使用含有澳乙锭的溶液时,请戴好手套.将琼脂糖溶液倒入制胶模中,然后在适当位置处插上梳子凝胶厚度一般在3~5mm之间.在室温下使胶凝固(大约30分钟~1小时),然后放置于电泳槽中进展电泳注凝胶不立即使用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存,一般可保存2〜5天琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最正确分辨范围6xLoadingBuffer(DNA电泳用)组份浓度水后,充分搅拌溶解.参加5ml的甘油(Glycerol)后充分混匀.用DEPC处理水定容至10ml后,室温保存核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法20XSSC组份浓度
3.0MNaCl
0.3M柠檬酸钠配制量1L配制方法
1.称量以下试剂,置于1L烧杯中
2.向烧杯中参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.滴加14NHCL调节pH值至
7.0后,加去离子水将溶液定容至1L.高温高压灭菌后,室温保存20XSSPEBuffer组份浓度
3.0MNaCl
0.2MNaH2P
040.02MEDTA配制量1L配制方法.称量以下试剂,置于1L烧杯中.向烧杯中参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.加NaOH调节pH值至
7.4约
6.5ml的10NNaOH.加去离子水将溶液定容至1L.高温高压灭菌后,室温保存xDenhardfs溶液组份浓度配制量500ml配制方法.称量以下试剂,置于500ml烧杯中.加去离子水约400ml充分搅拌溶解.加去离子水将溶液定容至500mL.用
0.45mm漉膜过滤后,分装成每份25ml.一20℃保存
0.5M磷酸盐Buffer组份浓度
0.5MNa2HP04配制量1L配制方法.称量134gNa2HP04・7H20置于1L烧杯中.参加约800ml的去离子水充分搅拌溶解.参加85%的H3P04浓磷酸调节溶液pH值至
7.
2.加去离子水定容至1L.高温高压灭菌后,室温保存组份浓度10mg/mlSalmonDNA配制量约100ml配制方法.称取鞋鱼精DNA2g置于500ml烧杯中参加约200ml的TEBuffer.用磁力搅拌器室温搅拌2〜4小时,溶解后参加4ml的5MNaCl使其终浓度为
0.1M.用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次.回收水相溶液后,使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次,以切断DNA.参加2倍体积的预冷乙醇进展乙醇沉淀.离心回收DNA后,溶解于100ml的去离子水中,测定溶液的0D260值.计算溶液的DNA浓度后稀释DNA溶液至1mg/ml.煮沸10分钟后,分装成小份1ml/份-20C保存.使用前在沸水浴中加热5分钟后,迅速冰浴冷却组份浓度15MNaCI
0.5MNaOH配制量1L配制方法
1.称曼下列试剂.置于1L烧杯中.组份浓度配制量约100ml配制方法
1.称量以下试剂,置于200ml烧杯中组份浓度配制量100ml配制方法
1.称量以卜.试剂,置于200nil烧杯中.充分混匀后,使用
0.45um滤膜滤去杂质后使用组份浓度39inMGlycine48mMTris
0.037%W/VSDS20%V/V甲醇配制量1L配制方法
1.称量以下试剂,置于1L烧杯中.向烧杯中参加约600ml的去离子水,充分搅拌溶解.加去离子水将溶液定容至800nli后,参加200ml的甲鸥.室温保存组份浓度20mMTris-HCl150mMNaCI
0.05%V/VTween20配制量1L配制方法.称量以下试剂,置于1L烧杯中.向烧杯中参加约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.参加
0.5mlTween20后充分混匀.加去离子水将溶液定容至】L后,4C保存组份浓度5%W/V脱脂奶粉/TBSTBuffer配制量100ml配制方法
1.称量5g脱脂奶粉参加到100ml的TBSTBuffer中,充分搅拌溶解
1.4c保存待用本封闭液应该现配现用实验室常用培养基的配制方法Ampicillin100mg/ml组份浓度100mg/mlAmpicillin配制量50ml配制方法
1.称量5gAmpicillin置于50ml离心管中配制方法1称取下列试剂,置于1L烧杯中组份浓度Tryptone10gYeastExtract5g配制量NaCI10gIL配制方法
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解,
1.称取以
3.滴加5NNaOH约02ml调节pH值至
7.0下试剂置于1L
4.加去离子水将培界基定容至1J烧杯中
2.参加约
5.高温高压灭菌后.4C保存.800ml组份浓度250mMTris-HCIpH
6.8配制量10%W/VSDS5ml配制方法
0.5%WVBPB
1.量取以下试剂,置于10ml塑料离心管50%V/V甘油中5%W,V0•琉基乙i»2-ME
2.加去离子水溶解后定容至5组份浓度890mMTris•周酸,20mMEDTA配制量1L配制方法
1.称M下列试剂,置于1L烧杯中Tris108g10xMOPSBuffer组份浓度NmEDTA・2HQ
7.44g200mMMOPS20mMNaOAc稀酸55g10mMEDTA配制品
2.向烧林中加入约800ml的去离子水.充分搅拌溶解.1L配制方法
3.加去施子水将溶液定容至1L后室温保存.配制量30mMEDTA配制方法36%WGlycerol
0.05%WVXyleneCyanolFF10xLoading_BufferRNA电泳用组份浓度
0.05%WVBromophenolBlue10mMEDTA10ml配制量配制方法50%VVGlycerol
1.称量以下试剂,置于10ml离心管中025%WVXyleneCyanolFF
2.向离心管025%WVBromophenolBlue一中参加约41nl的DEPC处理。