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文本内容:
核酸提取纯化试剂使用说明书【产品名称】细菌基因组DNA纯化试剂禽英文名称SurbiopurebacteriaDNAKit【包装规格】10017盒、9617盒【适用范围】各类革兰氏阴性曲和阳性菌等【原理】细菌样本经过消化液处理后与裂解结合镀冲液混合.使得细胞破碎并将核酸棒放.在裂解缓冲液中纳米越珠颗粒通过表面修饰的功铺基团能与游理的基因组DNA特异性的结合,形成磁珠-DNA复合物.在外磁场力的作用下,将超珠-DNA或合物转移到洗涤缓冲液中,洗去多余的杂垢再在外磁场力的作用下转移到洗脱缓冲液中,将DNA洗脱回收【组成成份】注r若的买的是Sup4M1601请在使用前在BufferWA中加入30mL的无水乙静在BufferWB中加入56mL的无水乙除.无水乙静(分析纯)请用户自备.【储存注意事项】1蛋白酰K.溶菌怅.RNascA等酶溶液请于-20匕保存若溶液RS中加入RNaseA后,请于2-8匕保存
2、除梅以外其他试剂于室温15-25D保存
3、试剂盒有效期为12个月,请在有效期内使用.【适用设备与仪器】磁性分寓架、32通量全自动核酸提取仪、96通量全自动核酸提取仪【样本要求】该试剂盒可以提取各类革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌样本批不超过1x10个细菌【操作方法】
一、样本前处理
1、取14nl过夜培养的菌液(视菌液浓度而定,若是容易长的的,如枯草芽胞杆菌浓度高,取hnl即可,否则样品容易翱化)室温下
13.000xg离心Imin收集的体,尽量移除上清.菌液较多时可以通过多次离心收集曲体a.革兰氏阳性菌处理:加入20HL溶菌悔溶液震荡混匀,37C孵百30min-lh(水浴锅孵育瓶每隔5min顺倒混匀•次)b.革兰氏阴性菌处理:如果是大肠杆菌、变形杆的、痢疾杆的肺炎杆菌、沙门民菌、志贺氏菌、副流感杆菌、军团菌等,可以直接进行下一步
2、在处埋好的菌体,直接加入3001(RS、40mg酸洗玻璃珠、20ProteinaseK(20ing/inL).涡旋震荡5min.海匀后于56c水溶孵£10min
3、
12.000rpm离心10min取上清进行I一步
二、若购买的是SuXMW”请按照如下手工操作方法进行实验(用户自备磁性分离架)4取第3步上清液到新的离心管里加入50HiLBumrAVL和125陷的异丙醉(用户自得),充分振荡混匀将离心管放入56X金属浴或水浴中15min期间每隔5min上下期倒胸心管几次
5、加15“L己混匀的破珠到熟心管中,充分振荡,使磁珠分散在溶液中,室温放置lOniin期间每隔2-3minI下顺倒离心管几次;
6、将黑心管放入磁性分禽架使其吸附磁珠,磁吸时间Imin.吸弃液体.从磁性分离架上移开岗心管;
7、加入500mLBufferWA到离心管中,振荡混匀2min尽可能将薇珠振到完全分散使用磁性分离架吸附磁珠吸弃液体从磁性分离架上移走离心管;
8、加入700此BufferWB到离心管中上下帧倒混匀Imin确保磁珠完全分散.使用磁性分离架吸附遨珠吸弃液体9从磁性分离架上移走离心管,重复步骤8一次(注意此步骤确保液体弁干净)
10、室温开26干燥5min;IIJj||80-100pl.BuftcrDE振荡混匀,此时禽心管塔可能会粘附磁珠,可以用移液器吸起离心管里的BufferDE将其吹打下来,将离心管放至60c金属浴或水浴中lOmin(注意期间每隔2・3min混匀几次)12使用磁性分离架吸附横珠,吸取含有DNA的液体转移到干净无菌的离心管备用
三、配套自动化仪器使用I、样本前处理与手工提取一致a.若购买的是Supd4I601以本公司32通量全自动核酸提取仪为例,请按照如下操作方法进行在96孔深孔板的第I、7列中各加入5(X)MLButfciRVL和125ML的异丙醉(用户自备》,在第
2、8列中各加入50(MLBu曲WA(清确认已加无水乙醉)和15比破珠(注意破珠在加入前已经混合均匀)在第
3、4和
9、10列中各加入lOOpLBuMrWB(请确认已加无水乙券)在第
6、12列中各加入lOOpLBunbrDE.b.若购买的是SupQ41602以本公司32通量全自动核酸提取仪为例,请按照如下操作方法进行将室温放置的96孔试制板触倒3-5次,有条件的用户可以在去除塑封膜前在96孔板离心机中短西离心,后没有离心机也可以手甩,避免挂液小心撕去年封膜,确认板了的方向(磁珠在2/8列)
2、在96孔板的第
1、7列中各加入细菌样本处理后的上清液.
3、将96孔板放入全自动核酸提取仪的指定位置中,装上磁棒护套.4请按以卜程序进行实5乳注裂解温度设置成80C裂解加热终止步躲2洗脱温度设置成70C洗脱温度开始步骤6・
5、仪器程序运行结束后.将第
6、12列的BuftDE转移至干净的无曲离心管子中备用.如不急需使用DNA可以将其放入-20C冻存.【产品性能参考数值】纯化的DNAOD
260.OD280比值
1.7-
2.
1.【产品的局限性】样本样本量建议少于1x10”个细菌.结果就择本试剂盒手工提取的效率可能会比仪器提取稍低,由于手工操作会有一定的误差造成的,【注意事项】I如果室温过低,BufferRS和Buf佞rAVL可能会有少许晶体析出或变浑浊,放入55c的水浴中预热5-10min确认溶液澄清后再使用对提取效果无影响
2、上述的程序适用于本公司全自动核酸提取仪.如果用户使用其他品牌的核酸提取仪.需根据实际使用的仪然性准进行调整程序.【基本信息】生产企业广州赛百纯生物科技有限公司地址漏3栋401单元联系方式邮编510000营销部网址货号Sup-041601Sup-041602主要成分试剂盒规格I00T96T蛋白而K2inL2inL蛋白酶K溶液RNascA2mL2mL的溶液溶菌物2inL2mL酹溶液BufferRS30mL30mL市忌溶液BufferAVL50mL96孔预分装试剂板6块强变性剂和Tris缓冲液BufferWA20mL高盐溶液BufferWBx214mLx2低盐溶液BufferDElOniLTris盐溶液磁珠
1.5mL祗珠溶液研磨介质
4.0g
4.0g酸洗成陶球<
0.1-
0.2mm)说明书11ac■InSm及Woe容积ul110:0010:000900快开启80c22混合0:000:0060200快关册31绐合0:0010:0060900快关闭42■洗I0:002:0060500快关闭53第洗20:002:0030700快关闭64*洗30:001:0030700快关闭76洗股2:0010:00120100快开启70匕84干燥0:000:300200快关闭。