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产品名称丁基-琼脂糖凝胶4FF性状白色微球,凝胶状,保存在20%酒精溶液中凝胶类型疏水层析填料结构成分4舟交联琼脂糖粒径45-165um工作PH值:2-14(短时间);3-13(长时间)操作温度4-40C配基密度30施ol/mL保存条件4〜25℃密闭保存应用疏水层析介质,快流速,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等外观本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质操作步骤1装柱
(1)让所有的材料和试剂达到室温配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液
(2)根据柱子大小取所需量的凝胶,清洗掉20舟乙醇,抽干,用初始缓冲液(按凝胶缓冲液=31的比例)配成匀浆
(3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡
(4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头
(5)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的L33倍的流速流过,使柱床稳定用2〜3倍柱体积的缓冲液平衡柱子2平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液如
0.02〜
0.05moi/L的PBS加1~
2.5mol/L(NH4)2S04等3上样
(1)样品用平衡液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样
(2)一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡液洗去杂质,再选择一种洗脱液洗下目标产品
(3)介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强,介质对组分吸附牢4洗脱疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱最常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液,如
0.02〜
0.05mol/L的PBS5再生一般用低盐浓度的缓冲液洗,洗10倍以上柱体积,接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去6在位清洗
(1)对于以离子键结合上去的蛋白,可以用2MNacl去除
(2)对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类,可用l\lNaOH去除
(3)对强疏水性结合的蛋白、脂类等,用4〜10倍柱体积的70席乙醇或30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡清洗完毕后,用至少3倍缓冲液平衡柱子7注意在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入8去热源用
0.5M的氢氧化钠清洗柱子5飞小时或用
0.IV的氢氧化钠24小时或用以卜方法步骤去除:12倍柱体枳的70%乙醇2倍柱体积501nMTris-HclpH5;1倍柱体积4M尿素;3倍柱体枳的Tris缓冲液+
0.IMNacl上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制9消毒用
0.51MNaOH室温下洗8~10倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。