人一氧化氮（NO）ELISA试剂盒使用说明书

人一氧化氮NOELISA试剂盒说明书本试剂盒仅供研究使用药品名称通用名人一氧化氮NO酶联免疫分析试剂盒使用目的本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中一氧化氮NO含量实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮NO水平用纯化的一氧化氮NO抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮NO再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样品中的一氧化氮NO呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度OD值，通过标准曲线计算样品中人一氧化氮N0浓度试剂盒组成标本要求.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的HRP活性操作步骤.标准品的稀释与加样在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第

一、第二孔中分别加标准品100可，然后在第

一、第二孔中加标准品稀释液503，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取分别加到第三孔和第四孔，再在第

三、第四孔分别加标准品稀释液5011混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50用弃掉，再各取50|J分别加到第

五、第六孔中，再在第

五、第六孔中分别加标准品稀释液50uL混匀；混匀后从第

五、第六孔中各取50m分别加到第

七、第八孔中，再在第

七、第八孔中分别加标准品稀释液50可，混匀后从第

七、第八孔中分别取50111加到第

九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50%混匀后从第九第十孔中各取50可弃掉稀释后各孔加样量都为50见浓度分别为150|imol/L100|imol/L50|imol/L2511moi/L

12.5|imol/Lo.加样分别设空白孔空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同、待测样品孔在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40W，然后再加待测样品1011样品最终稀释度为5倍加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀.温育用封板膜封板后置37温育30分钟.配液将20倍浓缩洗涤液用蒸偏水20倍稀释后备用.洗涤小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干.力「I酶每孔加入酶标试剂50可，空白孔除外.温育操作同

3.洗涤操作同

5.显色每孔先加入显色剂A50|J再加入显色剂B50W，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟..终止每孔加终止液50|iL终止反应（此时蓝色立转黄色）.测定以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）测定应在加终止液后15分钟以内进行计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数即为样品的实际浓度注意事项.试剂盒从冷臧环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染底物请避光保存严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理本试剂不同批号组分不得混用.如与英文说明书有异，以英文说明书为准检测范围10|imol/L-200|iitio1/L规格96人份/盒保存条件及有效期.试剂盒保存；2-8℃o.有效期6个月120倍浓缩洗涤液50mlX1瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准品225gmol/L

0.5mlXI瓶3酶标包被板12孔义8条9标准品稀释液

1.5mlXI瓶4样品稀释液6mlX1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlXI瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlX1/瓶12密封袋1个。