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猪瘟病毒抗体ELISA检测方法原理猪瘟病毒CSFVELISA抗体检测试剂盒,酶标板包被猪瘟病毒E2抗原gp55蛋白,如果待检样品中含有猪瘟抗体,与其包被的抗原结合后,将阻断HRP酶标记的E2单克隆抗体与包被的抗原结合后,将阻断的HRP酶标记的E2单克隆抗体与包被抗原的结合,从而减少显色反应试剂IX洗涤液10X洗涤缓冲液用蒸储水稀释10倍配成IX洗涤液、TMB底物液设备耗材单道微量移液器和吸头、计时器、加样槽、蒸偏水、酶标仪450nmo操作步骤.试剂盒内所有组份取出,在恒温箱25+31中放置至少60分钟,恢复至室温,打开铝箔袋取出抗原包被板.在稀释板中加入70uL样品稀释液,各孔加入70uL血清样品同样比例稀释阳性对照血清PC与阴性对照血清NC充分混匀于抗原包被板孔中分别加入100UL稀释后的样品以及100uL稀释后阴性对照血清NC和阳性对照血清POo盖上封板膜,室温25±30下孵育60分钟3•洗板,弃去孔中液体,每孔加300uLl倍洗涤液,洗涤3次最后一次洗涤后将酶标版在吸水纸上轻轻拍干,严禁各步骤之间孔板出现干燥情况每孔加入100ULCSFVE2HRP标记抗体盖上封板膜,室温(25±3()下孵育30分钟.重复步骤
1、
2、3o.每孔加入lOOuLTMB底物液.盖上封板膜,室温(25±30下孵育15分钟每孔加入50uL终止液,终止酶促反应使用450nm波长测量吸光度值.结果判定与计算用酶标仪测定0D450nm结果判读.阴性对照(NC)OD450mm平均值>
0.7;阳性对照(PC)PI平均值>50%.计算公式通过下面公式计算样品竞争值(猊^)PT(阻断百分率)=(NCOD均值-样品0D值)《NCOD均值X100%如果结果可疑,检查样品(是否被细菌污染等)并再次检测如果再次检测后结果仍可疑,检查农场的流行病学情况并再次收集样品重新检测注意事项.请勿使用过期的试剂.不同批次的试剂盒试剂请勿混用.小心避免污染试剂盒的组分.检测仪器设备等(移液器、吸头、恒温箱、洗板机和酶标仪)是否可以正常使用.每一次加样品前请更换移液器吸头.使用试剂时注意避免接触皮肤和粘膜,所有在诊断检测中用到的原材料应当进行无害化处理.试剂盒的所有试剂在使用前必须在室温25±3C平衡30分钟.每个加样槽对应一种试剂,请勿重复使用.所有试剂储存在2〜8€\使用前恢复至室温,使用后再冷藏保存PI值240%40%判定阳性阴性。