大鼠抗酶联免疫分析试剂盒使用说明书

大鼠抗凝血酶（AT）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围:8U/L-240U/L使用目的本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中抗凝血酶（AT）的含量实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠抗凝血酶（AT）水平用纯化的大鼠抗凝血酶（AT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗凝血酶（AT）再与HRP标记的抗凝血酶（AT）抗体结合，形成抗体-抗原-抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样品中的抗凝血酶（AT）呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠抗凝血酶（AT）浓度试剂盒组成标本要求.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验若不能马上进行试验，可将标本放于・20℃保存，但应避免反复冻融.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性操作步骤.标准品的稀释本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释.加样分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔在酶标包被板上标准品准确加样50川待测样品孔中先加样品稀释液40囚然后再加待测样品10可（样品最终稀释度为5倍）加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀.温育用封板膜封板后置37℃温育30分钟.配液将30倍浓缩洗涤液用蒸储水30倍稀释后备用.洗涤小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干.加酶每孔加入酶标试剂50|il空白孔除外.温育操作同

3.洗涤操作同

5.显色每孔先加入显色剂A50|il再加入显色剂B50M，轻轻震荡混匀，37°避光显色10分钟..终止每孔加终止液50|11终止反应（此时蓝色立转黄色）1L测定以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）测定应在加终止液后15分钟以内进行操作程序总结准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，37c反应30分钟洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟SZ洗板5次，加入显色液A、B37c显色10分钟加入终止液15分钟之内读0D值计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数即为样品的实际浓度注意事项.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染.底物请避光保存.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准..所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理.本试剂不同批号组分不得混用保存条件及有效期［试剂盒保存:;2-8℃o

2.有效期6个月130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准品480U/L

0.5mlXI瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液

1.5mlXI瓶4样品稀释液6mlX1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlX1瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlXl/瓶12密封袋1个240U/L5号标准品150111的原倍标准品加入150出标准品稀释液120U/L4号标准品150^11的5号标准品加入150m标准品稀释液60U/L3号标准品150可的4号标准品加入150111标准品稀释液30U/L2号标准品150pli的3号标准品加入150山标准品稀释液15U/L1号标准品150111的2号标准品加入150111标准品稀释液。