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文本内容:
丙酮酸脱氢酶El测定试剂盒说明书试剂盒组成
1、30倍浓缩洗涤液20mlXl瓶7终止液6nli义1瓶
2、酶标试剂6ml义1瓶8标准品160pg/ml
0.5mlX1瓶
3、酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液L5mlXl瓶
4、样品稀释液6ml义1瓶10说明书1份
5、显色剂A液6ndXI瓶11封板膜2张
6、显色剂B液6ml义1/瓶12密封袋1个标本要求.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的HRP活性样本处理及要求L血清全血标本请于室温放置2小时或4c过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融2血浆可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.组织匀浆用预冷的PBS
0.01MpH=
7.4冲洗组织,去除残留血液匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果,称重后将组织剪碎将剪碎的组织与对应体积的PBS一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融将匀浆液于5000Xg离心5〜10分钟取上清检测.细胞培养物上清或其它生物标本1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融试剂盒性能.灵敏度zui小的检测浓度小于1号标准品稀释度的线性样品线性回归与预期浓度相关系数R值为
0.990o.特异性不与其它细胞因子反应.重复性板内、板间变异系数均小于10%实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中血清素/血清胺ST水平用纯化的血清素/血清胺ST抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入血清素/血清胺ST再与HRP标记的血清素/血清胺ST抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻di洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶S的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样品中的血清素/血清胺ST呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度0D值,通过标准曲线计算样品中血清素/血清胺ST浓度保存条件及有效期.试剂盒保存;2-8℃o.有效期6个月试剂盒特点
1、高效、灵敏、特异的抗体;
2、稳定的重复性和可靠性;
3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
5、节省实验经费操作步骤.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释.加样分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔在酶标包被板上标准品准确加样50ul待测样品孔中先加样品稀释液40U1然后再加待测样品10口1(样品最终稀释度为5倍)加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀.温育用封板膜封板后置37℃温育30分钟.配液将30倍浓缩洗涤液用蒸储水30倍稀释后备用.洗涤小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干6加酶每孔加入酶标试剂50ul空白孔除外.温育操作同
3.洗涤操作同
5.显色每孔先加入显色剂A50U1再加入显色剂B50U1轻轻震荡混匀,37°避光显色10分钟..终止每孔加终止液50U1终止反应(此时蓝色立转黄色).测定以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(0D值)测定应在加终止液后15分钟以内进行计算以标准物的浓度为横坐标,0D值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的0D值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与0D值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的0D值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度注意事项L试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔如标本中待测物质含量过高(样本0D值大于标准品孔第一孔的0D值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(XnX5).封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.底物请避光保存.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准..所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理.本试剂不同批号组分不得混用80pg/ml5号标准品150111的原倍标准品加入150U1标准品稀释液40pg/ml4号标准品150Hl的5号标准品加入150U1标准品稀释液20pg/ml3号标准品150u1的4号标准品加入150H1标准品稀释液10pg/ml2号标准品150Hl的3号标准品加入150U1标准品稀释液5pg/ml1号标准品150Hl的2号标准品加入150u1标准品稀释液。