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土壤蔗糖酶活性测定.原理1采用-二硝基水杨酸比色法该方法以蔗糖为基质,基质在土壤蔗糖酶作3,5用下生成葡萄糖,葡萄糖和-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的-氨基-硝基水3,53-5杨酸,并在波长下有最大吸光值508rlm.测定方法2
①称取壤土、砂土、粘土风干土于离心管中,加入
0.15g
0.3g
0.1g10mL
0.06甲苯和磷酸缓冲液,再加蔗糖溶液,摇匀后加盖,放进mL1mL ph
5.53mL8%36〜37℃的培养箱中进行培养24个小时;
②培养完成后取出,摇匀,并于4000r/min离心5min;
③取上层清液于玻璃管中,并加入-二硝基水杨酸,再立
0.2ml20ml
0.5ml3,5即将玻璃管沸水浴中加热5min,加热完毕后在自来水流下冷却3min;
④将显色液体用蒸馈水稀释到在波长下比色,记录吸光值5ml,508nm.蔗糖酶标准曲线的测定方法3葡萄糖标准溶液的配制1饱和苯甲酸溶液的配制a.在洁净的烧杯中加入适量蒸储水,慢慢加入少量苯甲酸同时用玻璃棒搅拌,直至苯甲酸溶解的同时出现析出的苯甲酸晶体为止.标准葡萄糖溶液的配制b称取葡萄糖溶解于适量苯甲酸饱和溶液中,并取容量瓶用苯甲500mg100ml酸饱和溶液定容5mg/ml o.操作步骤
2.取支洁净玻璃管编号a1120ml0—10按下表加液b.编号葡萄糖母液01234567891cl ml
00.
0050.
010.
0150.
020.
0250.
030.04饱和苯甲酸
0.
050.
060.07ml
0.
20.
1950.
190.
1850.
180.
1750.
170.
160.
150.14葡萄糖浓度吸光
0.13mg/ml
00.
0050.
010.
0150.
020.
0250.
030.
040.
050.
060.07值在玻璃管中A508nm
00.
050.
1170.
2270.
310.
3920.
490.
6660.
8391.
0061.176c.各加入二硝基水杨酸溶液,并立刻放入沸水浴中加热.加热后,立
0.5ml3,5-5min刻将玻璃管在流动自来水下冷却冷却完毕后,用蒸储水定容至.将显3min.5ml.cI色液在波长下比色508nm.计算4蔗糖酶活性以后土壤中含葡萄糖的数表示24h1g mg葡萄糖mg;axlOO从标准曲线查得的葡萄糖数—换算系数a—mg100。