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脱氢酶活性测定实验报告标准曲线的绘制:TTC浓度()TTC ug/mL816243240吸光值A
0.
0410.
1860.
2980.
3120.456标准曲线TTC—吸光值一线性A(吸光值的)A y=
0.56x
3.0282R”=
0.95211632谎度()40TTC ug/nL土壤脱氢酶的吸光值记录:编号平均123吸光值A
0.
1450.
1670.
1860.166由标准曲线可得相应浓度为TTC
2.0314ug/mL则土壤脱氢酶活性=ABC=
2.0314*18*1=
36.5652式中为查出的浓度;为培养时间校正值为比色时稀释倍数⑴A TTCug/mL B18h;C思考题:.影响脱氢酶活性的因素有哪些?1答pH每种酶都有最适pH,在此pH下,酶活性最大;温度酶活性随着温度的升高而增加,在最适温度时达到最高值,然后开始下降;激活剂可以促进酶活性;抑制剂会使酶活性降低;还有内因如底物浓度和酶浓度•已知乳酸脱氢酶()在的递氢作用下,使乳酸脱氢生成丙酮酸丙酮酸在2LDH NAD+碱性溶液中与-二硝基苯肌生成-二硝基苯踪使溶液呈蓝色颜色的深浅与丙酮酸2,42,4浓度成正比请设计一个测定动物肝脏乳酸脱氢酶活性的实验答1,校正曲线的制作
(1)按下表操作加入物(ml)B12345丙酮酸标准液
00.
0250.
050.
10.
150.2底物缓冲液
0.
50.
4750.
450.
40.
350.3去离子水
0.
110.
110.
110.
110.
110.11二硝基苯肺
0.
50.
50.
50.
50.
50.5NaOH
5.
05.
05.
05.
05.
05.0相当于金氏单位01252505007501000
(2)37度水浴15分钟,室温放置5min后,于440nm波长处比色,比色杯光径为
1.0cm,用B管调零,2,酶活性的测定()1加入物(ml)测定管对照管
0.
010.01血清
0.
50.5NAD+底物缓冲液(37度水浴5min)
0.1-NAD+溶液(37度水浴15min)
0.
50.52,4二硝基苯肺-
0.1NAD+溶液(37度水浴15分钟)
5.
05.
00.4mol/L溶液读取各管吸光度以吸光度值为纵坐标,相应的酶活性单位为横坐标绘制校正曲线2混匀,室温放置5min后,于440nm波长处比色,零,比色杯光径为
1.0cm,用蒸镭水调读取各管吸光度以测定管与对照管吸光度之差值查校正曲线,得酶活性单位定义以100ml血清,37度,作用底物15min,产生lumol丙酮酸为一个金氏单位。