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第一章与化学产品的分离制备相比较，生物大分子的制备有以下主要特点1:⑴生物材料的组成极其复杂，常常包含有数百种乃至几千种化合物⑵许多生物大分子在生物材料中的含量极微，分离纯化的步骤繁多，流程长⑶许多生物大分子一旦离开了生物体内的环境时就极易失活，因此分离过程中如何防止其失活，就是生物大分子提取制备最困难之处（）生物大分子的制备几乎都是在溶液中进行的，温度、值、离子强度等各种参数对4pH溶液中各种组成的综合影响，很难准确估计和判断生物大分子的制备通常可按以下步骤进行2:1确定要制备的生物大分子的目的和要求，是进行科研、开发还是要发现新的物质2建立相应的可靠分析测定方法，是制备生物大分子的关键3通过文献调研和预备性实验，掌握生物大分子目的产物的物理化学性质@生物材料的破碎和预处理5分离纯化方案的选择和探索，这是最困难的过程6生物大分子制备物的均一性（即纯度）的鉴定，耍求达到一维电泳一条带，二维电泳一个点，或和毛细管电泳都是一个峰HPLC
⑦产物的浓缩，干燥和保存分析测定的方法主要有两类3:即生物学和物理、化学的测定方法生物学的测定法主耍有:酶的各种测活方法、蛋白质含量的各种测定法、免疫化学方法、放射性同位素示踪法等；物理、化学方法主要有比色法、气相色谱和液相色谱法、光谱法（紫外/可见、红外和荧光等分光光度法）、电泳法、以及核磁共振等实际操作中尽可能多用仪器分析方法，以使分析测定更加快速、简便生物大分子的分离纯化方法有多种，主要是利用它们之间特异性的差异，如分子的大小、形4:状、酸碱性、溶解性、溶解度、极性、电荷和与其他分子的亲和性等各种方法的基本原理可以归纳为两个方面
①利用混合物中几个组分分配系数的差异，把它们分配到两个或几个相中，如盐析、有机溶剂沉淀、层析和结晶等；
②将混合物置于某一物相（大多数是液相）中，通过物理力场的作用，使各组分分配于不同的区域，从而达到分离的目的，如电泳、离心、超滤等目前纯化蛋白质等生物大分子的关键技术是电泳、层析和高速与超速离心需了解的生物大分子物理、化学性质，主要有5:、在水和各种有机溶剂中的溶解性
1、在不同温度、值和各种缓冲液中生物大分子的稳定性2pH、固态时对温度、含水量和冻干时的稳定性「
3、各种物理性质如分子的大小、穿膜的能力、带电的情况、在电场中的行为、离心沉降4的表现、在各种凝胶、树脂等填料中的分配系数、其他化学性质如对各种蛋白酶、水解酶的稳定性和对各种化学试剂的稳定性
5、对其他生物分子的特殊亲和力6琼脂糖与等体积的水混合溟化氨，调节至NaOH pHll温度维持在左右20c反应在分钟内3~12加入大量冰屑布氏漏*抽滤，缓冲液抽滤洗涤⑵、环氧基活化法在热的浓碱溶液中，多糖类化合物与环氧氯丙烷作用生成环氧化合物;在碱性条件下，其环氧化合物又能与氨基酸或蛋白质上氨基偶联坨-O-C CH—CR+HC1环犯箔丙烷多糖载体活化载体、/这种活化方法的优点是活化后不引入电荷基团，而且基质与配体形成的、和键都N—C O-C S-C很稳定，所以配体与基质结合紧密，亲和吸附剂使用寿命长，而且便于在亲和层析中使用较强烈的洗脱手段，另外这种处理方法没有漠化氟的毒性它的缺点是用环氧氯丙烷活化的基质在与配体偶联时需要碱性条件，为温度为这样的条件对于一些比较敏感的配体pH9-13,20-40C可能不适用特异性洗脱方法的优点7:特异性强，分辨率高；洗脱条件温和，大分子物质不容易变性缺点平衡比较慢，所以特异性洗脱往往需要较常的时间和较大的洗脱条件；价格昂贵第九章有以下特点1HPLC高压一一压力可达色谱柱每米降压为以上「150-300Kg/cm2c75Kg/cm高速-----流速为
0.1-
10.0ml/mino高效一一可达塔板每米在一根柱中同时分离成份可达种5000100高灵敏度一一紫外检测器灵敏度可达同时消耗样品少O.Olngo与经典液相色谱相比有以下优点2:HPLC速度快一一通常分析一个样品在有些样品甚至在内即可完成分辨率高——可15-30min,5min选择固定相和流动相以达到最佳分离效果灵敏度高一一紫外检测器可达荧光和电化学检测器可达柱子可反复使用一一用一O.Olng,O.lpgo根色谱柱可分离不同的化合物样品量少，容易回收一一样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备其缺点是价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多目前的发展趋势是向生物化学和药物分析及制备型倾斜高效液相色谱仪4由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统等五大部分组成高效液相色谱分析方法的一般步骤5:通常在确定被分析的样品以后，要建立一种高效液相色谱分析方法必须解决以下问题
①根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种高效液相色谱分析方法
②选择一根适用的色谱柱,确定柱的规格（柱内径及柱长）和选用固定相（粒径及孔径）
③选择适当的或优化的分离操作条件，确定流动相的组成、流速及洗脱方式
④由获得的色谱图进行定性分析和定量分析化学键合固定相6将有机官能团通过化学反应共价键合到硅胶表面的游离羟基上而形成的固定相称为化学键合相这类固定相的突出特点是耐溶剂冲洗，并且可以通过改变键合相有机官能团的类型来改变分离的选择性键合相的种类化学键合相按键合官能团的极性分为极性和非极性键合相两种反相键合相色谱常用的极性键合相主要有氟基（）、氨基（）和二醇基（）-CN-NH2DIOL键合相正相键合相色谱常用的非极性键合相主要有各种烷基（）和苯基、苯甲基等，以C1-C18C18应用最广选择流动相时应考虑以下几个方面7动相应不改变填料的任何性质
②纯度色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时
③必须与检测器匹配使用检测器时，所用流动相在检测波长下UV应没有吸收，或吸收很小
④粘度要低（应＜）
⑤对样品的溶解度要适宜
⑥样品易于回2cp收应选用挥发性溶剂流动相的选择8:正相色谱的流动相通常采用烷煌加适量极性调整剂反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂,如甲醇、乙月青、四氢吠喃等极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相但则推荐采用乙月青-水系统做初始实验，因为与甲Snyder醇相比，乙睛的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外处检测的要求，因此，185-205nm综合来看，乙月青■水系统要优于甲醇■水系统流动相的脱气
9.所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作气泡还会影响柱HPLC的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测（噪声增大，基线不稳，突然跳动）止匕外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应溶解气体还会引起溶剂的变化，对分离或分析结果带来误差pH常用的脱气方法有加热煮沸、抽真空、超声、吹氢等正相色谱法与反相色谱法比较表10:正相色谱法反相色谱法固定相极性高中中低〜〜流动相极性低中中高〜〜组分洗脱次序极性小先洗出极性大先洗出第十二章基本概念1:重组又称克隆、分子克隆、有时也称基因克隆重组是指遗传信息按人DNA DNA DNA的需要，将一种生物的基因或化学合成的基因，掺入载体，运送到另一种宿主细胞，通过载体的复制，可得到外源或基因的无性繁殖和大量相应的基因产物最终目的是把一个生物体DNA中的遗传信息（）转入另一个生物体DNA重组操作是基因工程的核心DNA基因工程在植物上的应用2:（）基因工程改良作物的优越性
①打破了周期长、效率低的缺限；
②打破种间隔离障碍；1
③按人们意愿改造（）基因工程改良作物2基因工程在动物上的应用转基因在动物上转基因鼠、转基因牛、转基因猪、转基因猴、转基因兔、转基因羊基因工程的人类基因治疗发酵工业理论研究重组的主要步骤3DNA、分离目的基因（片段）；1DNA、选择或构建载体；
2、连接目的基因与载体；
3、重组导入宿主细胞和外源基因表达等4DNA限制性内切酶4:定义是指已被证明是限制修饰系统中的一个组成部分，具有识别双链分子中的DNA某种特定核酸序列并由此切割双链结构的酶统称为限制性内切酶DNA据限制酶切割的特点，可将它们分为两大类一类是切割部位无特异性的;另一类是可特异性地识别核甘酸序列，即只能在一定的序列上进行切割这种能被特异性识别的切割部位都DNA具有回文序列,也就是在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致在基因工程中使用的多数是后一类酶限制性内切酶可分为三大类型•类型和类型由于识别位点并非严格专一，很少被应用I III•类型是重组技术最为常用的工具酶II DNA类型限制性内切酶的特点II•识别位点严格专一•识别序列的碱基数一般为、、个（）468bp basepair•识别位点经常是一种回文序列的DNA限制性内切酉每的切割方式就切割位点相对于对称轴的位置而言，切割方式有三种•在对称轴侧切割产生粘端5,5,•在对称轴侧切割产生粘端3,3,•在对称轴处切割产生平段聚合酶5:DNA在体外合成系统中以为模板，催化单核甘酸重新合成一条与模板互补的序列有以DNA DNA下几类聚合酶大片段片段lDNA IKlenow聚合酶具有，聚合酶活性，，外切核酸酶活性和一外切核酸酶活性DNA I5-3,3f5,5,3,聚合酶活性是能以单链为模板，催化脱氧核甘酸底物合成与模板互补的3,DNA DNA序列而一外切酶活性则是能够除去延长的核甘酸链上的末端上的脱氧核昔酸3,5,r-OH鉴于聚合酶大片段具有上述两种催化活性，它可用于补齐限制性内切核酸酶切割DNA I产生的凹端，以及标记片段的末端3,DNA酶作用Klenow、用于同位素标记片段末端a DNA、合成的第二条链b cDNA、双脱氧法进行序列分析c Sanger、定位突变d核酸酶6核酸酶主要用于去除片段粘末端而产生平端；打开中发夹结构，使其成平端•S1DNA cDNA核糖核酸酉每在质粒提取时降解•RNaseA；从杂交体中去除未杂交的区RNA DNA-RNA RNA载体7P211质粒的生物学基本特性自主复制性不相容性稳定性寄生性表现型质粒复制类型严紧型质粒的复制受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制每个细胞拷贝数仅个•1—2松弛型质粒的复制不受宿主细胞蛋白质合成的•严格控制每个细胞拷贝数甚至可高达数百个质粒的构型8DNA构型:两条核甘酸链均保持着完整的环形结•SC构，呈现超螺旋DNA构型:两条链中只有一条保持着完整的环形结构，另一条链出现缺口，称之为开环•oc DNA构型:的双链均发生断裂而形成线性分•L DNA子噬简体9P212真核病毒10P213构建文库的操作主要有下列个步骤
①制备片段
②片段与载体的连接
③重组114DNA DNA体转化与克隆
④筛选鉴定基因组重组12DNA重组是指目的基因与载体分子进行重新组合过程的简称DNA连接片段的方法有黏性末端连接法、平端连接法、平黏连接法、连接法、人DNA T.A工接头连接法和同聚物加尾连接法等选择性标记基因13:P225分析基因的结构与产物14P225第十五章第十八章电泳是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象电泳分离利用荷1:电的溶质在电场中泳动速度的差别进行分离的方法聚丙烯酰胺凝胶电泳2:P327附录资料不需要的可以自行删除3电渗P364竹材重点知识竹材及非木质材料作为原料的应亩特局限15gA非木质原料应用中具有的优点来源广泛，价格低廉；12原料单一，对稳定产品质量有利，生产工艺易于控制;3备料工段设备简单（竹材除外）；4工业生产中动力消耗较木质原料少（加工、干燥等）B不利因素原料收获季节性强为保证常年生产，工厂需储备个月的原料,而该类58-9原料体积蓬松，占用地面与空间很大，造成储存场地之困难；原料收购局限性强非木质原料质地松散，造成收集与运输上的不便,为降低成本，收集6半径一般不超过公里；非木质原料储藏保管较难非木质原料所含糖类、1007淀粉及其它易分解的物质较木质材料高，易于虫蛀或产生霉变与腐烂（采取的措施高密度打包储存，切段堆积储存，干燥后储存，喷洒药剂储存等，但增加了工序和成本）；非木质原料含杂杂物多（蔗渣含以上的蔗髓，棉杆含残花和泥沙，芦820%苇有苇髓和叶鞘，稻壳含米坯等），对产品质量有影响，生产前应分离，增加了工序与成本；其它尚未解决的问题棉杆皮韧性大，缠绕设备造成堵塞、起火；原料易9水解，湿法牛产中造成的污染大；稻壳板硬度大，对刀具磨损十分严重等，目前尚无参考模式，有待进一步研究克服
2.分布概况竹子是森林资源之一中国竹类资源分为四个区黄河-长江竹区、长江-南岭竹区、华南竹区、西南高山竹区地下茎竹类植物在土中横向生长的茎部，有明显的分节，节上生根，节侧有芽，可萌发而3为新的地下茎或发笋出土成竹，俗称竹鞭，亦名鞭茎因竹种不同，地下茎有下列三种类型单轴型、合轴型、复轴型
4.竹秆竹秆是竹子的主题部分，分为秆柄、秆基和秆茎三部分）秆柄竹秆的最下部分，与竹鞭或母竹的秆基相连，细小、短缩、不生根，俗称螺丝1钉或龙眼鸡头，是竹子地上和地下系统连接输导的枢纽）秆基竹秆的入土生根部分，由数节至数节组成，节间短缩而粗大秆基各节密210集生根，称为竹根，形成竹株独立根系秆基、秆柄和竹根合称为竹死）秆茎竹秆的地上部分，端正通直，一般形圆而中空有节，上部分枝着叶每节有两3环，下环为獴环，又叫鞘环，是竹獴脱落后留下的环痕；上环为秆环，是居间分生组织停止生长后留下的环痕两环之间称为节内，两节之间称为节间相邻两节间有一木质横隔，称为节隔，着生于节内竹秆的节、节间形状和节间长度因竹种而有变化5•竹子各部位之间的关系竹连鞭，鞭生芽，芽孕笋，笋长竹，竹又养鞭，循环增殖，互为因果，鞭竹息息相关的统一有机整体
6.竹林的采伐竹林采伐时必须做到“采育兼顾”，才能达到竹林永续利用、资源永不枯竭之目的正确确定伐竹年龄、采伐强度、采伐季节、采伐方法四个技术环节是竹林采伐的关键所在
7.采伐竹龄竹林为异龄林，一般只能采取龄级择伐方式，根据竹类植物的生长发育规律，竹笋成竹后，秆形生长基本结束，体积不再有变化，但材质生长仍在进行，密度和力学强度仍在增长和变化，根据其变化情况可分为三个阶段，即材质增进期，材质稳定期和材质下降期竹子的采伐年龄最好在竹材材质稳定期,遵循“存三（度）砍四（度）不留七（度）”的原则
8.伐竹季节春栽夏劈秋冬伐一般竹林应该在冬季采伐，应在出笋当年的晚秋或冬季（小年春前）花年竹林，应砍伐竹叶发黄、即将换叶的小年竹，而不应砍伐竹叶茂密正在孵笋的大年竹；丛生竹林，一般夏秋季节出笋，采伐季节选在晚秋或早春，使新竹能发枝展叶原因该季节竹子处于休眠状态，竹液流动慢，同化作用较弱；a.可溶性物质变成复杂的有机物储存，竹材力学性质好，不易虫蛀；b.冬季，林地中主要害虫处于越冬状态，不会对采伐后的竹林造成伤害;该c.d.季节新竹尚未发出，可避免采伐时造成损伤
9.竹材的储藏与保管具体要求按照不同质量分类保管；1））按照规格大小，分别存放；2）先进先出，推陈出新；3）防虫防蛀，喷熏药物
410.竹材的缺陷及其发生规律）虫蛀和霉腐一般发生规律如下1竹黄较竹青严重；年生竹材较轻，年生以下较重；冬季采伐的a.b.6・73-5c.较轻，秋季次之，春季采伐的较重；山地生长的较平地生长的轻；通风透光储藏遭e.f.受损害的较少，阴暗不透风的则多1L竹壁竹秆圆筒状的外壳一般根部最厚，至上部递减，自内向外分为竹青、竹肉和竹黄三个部分
12.影响竹材密度的因素竹种与其地理分布有一定的关系，分布在气温较低、雨量较少的北部地A.区的竹材（如刚竹）密度较大，反之，则密度较小竹龄随着年龄的增长，密度不断的提高和变化（因竹材细胞壁和内容物B.是随竹龄的增加而逐渐充实和变化的），可根据其规律性作为确定竹材合理采伐年龄的理论依据之一立地条件气候温暖多湿，土壤深厚肥沃的条件下生长好，竹竿粗大，但C.组织疏松，维管束密度小，从而密度小，反之密度大竹秆部位同一竹种，自基部至稍部，密度逐渐增大，同一高度上，竹D.壁外侧高于内侧，有节部分大于无节部分
13.竹材特性竹材与木材相比，具有强度高、韧性大，刚性好、易加工等特点，使竹材具有多种多样的用途，但这些特性也在相当程度上限制了其优越性的发挥，竹材的基本特性如下1）易加工，用途广泛剖蔑、编织、弯曲成型、易染色漂白、原竹利用等；2）直径小，壁薄中空，具有尖削度强重比高，适于原竹利用，但不能像木材一样直接进行锯切、刨切和旋切，经过一定的措施可以获得高得率的旋切竹单板和纹理美观的刨切竹薄木；3）结构不均匀给加工利用带来很多不利影响（如竹青、竹黄对胶粘剂的湿润、胶合性能几乎为零，而竹肉则有良好的胶合性能；4）各向异性明显主要表现在纵向强度大，横向强度小，容易产生劈裂5）易虫蛀、腐朽和霉变竹材比木材含有更多的营养物质造成；6）运输费用大，难以长期保存壁薄中空，体积大，车辆实际装载量小，不宜长距离运输；易虫蛀、腐朽和霉变，不宜长时间保存；砍伐季节性强，规模化生产与原竹供应之间矛盾较为突出
14.竹材人造板的构成原则以克服竹材本身固有的某些缺陷，使竹材人造板具有幅面大且不变形、不开裂等特点为出发点的，主要遵循以下两个原则对称原则对称中心平面两侧的对应层，竹种、厚度、层数、纤维方向、含水1）率、制造方法相互对应）奇数性原则主要针对非定向结构的多层人造板
215.竹材人造板的结构特性1）结构的对称性尽可能的克服各向异性2）强度的均齐性材料在各个方向强度大小的差异，以均齐系数表达（竹纤维板、碎料板趋于1）3）材质的均匀性能提高板材外观质量，也可减少应力集中造成的破坏（板材优于竹材，结构单元越小的板材均匀性越好）.
16.胶层厚度不产生缺胶的情况下，越薄越好（20—50微米）？薄胶层变形需要的应力比厚胶层大1））随着胶层厚度的增加，流动或蠕变的几率增大2）胶层越厚，由膨胀差而引起界面的内应力与热应力大3）坚硬的胶粘剂，胶合界面在弯曲应力的作用下，薄胶层断裂强度高4）胶层越厚，气泡或其他缺陷数量增加，早期破坏几率增加
517.竹材胶合板是将竹材经过高温软化展平成竹片毛坯，再以科学的、比较简便的、连续化的加工方法和尽可能少改变竹材厚度和宽度的结合形式获得最大厚度和宽度的竹片，减少生产过程中的劳动消耗和胶粘剂用量，从而生产出保持竹材特性的强度高、刚性好、耐磨损的工程结构用竹材人造板竹材的高温软化•展平是该项工艺的主要特征A原竹截断截断先去斜头;a.由基至稍，分段截取;b.截弯存直，提高等级;c.留足余量d.B竹片软化的目的:将半圆形的竹筒展平，则竹筒的外表面受压应力，内表面受拉应力，其应力大小为丸•减小值是减小竹材展平时反向应力的有效手段,从而可以SI2r E减少展平时竹材内表面的裂缝的宽度和深度减小竹材弹性模量的方法和措施统称为竹材软化C.软化方法在目前的技术条件下，提高竹筒含水率和温度是提高竹材本身塑性、减小竹材弹性模量，从而达到减小展开过程中方向弯曲时拉伸应力的有效措施D.刨削加工目的:去青去黄，改善竹材表面性能，提高胶粘效果；1））使竹片全长上具有同一厚度，以获得较高胶粘性能和较小的厚度偏差2E.竹片干燥实践证明，使用时竹片的含水率应低于而使用时、应小于PF8%,UF才能获得理想的胶合强度12%,）预干燥目的为了提高竹片的干燥效率，主要设备是高效螺旋燃烧炉竹片干燥窑,1干燥周期较长，一般小时，终含水率由降至10-1235-50%12-15%）定型干燥因竹片是由圆弧状经水煮、高温软化、展平而成平直状，但在自然状2态中仍具有较大的弹性恢复力，故需采用加压的干燥和设备F组坯将面、背板竹片和涂过胶的芯板竹片组合成板坯的过程成为组坯板坯厚度的确定（）1）£s=100s-/100-zd式中为板坯厚度（各层竹片厚度之和，）合为竹材胶合板厚度）/为Xs mm,s（mm,板坯热压时的压缩率（％）板坯的压缩率与热压时的温度、压力和竹材的产地、竹龄等多种因素有关通常温度为单位压力为时，140-145C,板坯的压缩率为
13.0%-
16.0%o2）组坯操作注意事项面、背板竹片应预先区分好a.组坯时芯板与面、背板竹片纤维方向应互相垂直面板与背板竹片组坯时,竹青b.面朝外，竹黄面朝内；芯板竹片组坯时，为防止竹材胶合板由于结构不对称而产生变形，应将每张竹片的竹青、竹黄的朝向依次交替排列竹片厚度较大，宽度较小（平均毫米左右），涂胶量不大，因而其吸水膨c.100胀值（绝对值）不大，故芯板组坯时不必留有吸水膨胀后的间隙，只需将竹片涂胶后紧靠排列即可组坯时面、背板及芯板竹片组成的板坯要做到“一边一角一头”平齐，可为锯边工d.序提供纵边和横边两个基准面G热压胶合1）工艺过程竹片涂胶以后组成板坯，经过加温加压使胶粘剂固化，胶合成竹材胶合板的过程称为热压胶合，这是一个十分复杂的物理和化学变化过程可压力变化情况可分为三个阶段A第一阶段从放第一张板坯进入热压板至全部热压板闭和并达到要求的单位压力，称为自由加热期B第二阶段从热压板内的板坯达到要求的单位压力至降压开始，称为压力保持期；C第三阶段从热压板的板坯降压开始到热压板全部张开，称为降压期在降压期，因压力降低，板坯中的水蒸气急剧向外溢散，同时呈过热状态的水也很快变为水蒸气，因此产生板坯内外压力不平衡的现象，降压越快，压力不平衡就越大，严重的可使胶层剥离，即“鼓泡”，层数越多，鼓泡现象越多所以降压时务必缓慢进行，应在板坯内外的压力基本保持平衡的状态下进行，为防止“鼓泡”现象的发生，通常要求实行三段降压，即由工作压力降至“平衡压力”（即与板坯内部蒸汽压力保持平衡的外部压力，胶一PF般为这一阶段的降压速度可以快一点，一般层板掌握在内完成）;
0.3-
0.4Mpa,310-15s由“平衡压力”降至零，该阶段易发生鼓泡或“脱胶”，降压速度要缓慢，要求降压速度与水蒸气从板坯中排除的速度相适应，一般层板约在内完成，多层板应330-50S适当延长；由零到热压板完全张开，该段可打开阀门，以最大速度卸载，使热压板张开应注意的是压机最下面一个工作间隔中的板坯，在表显示为零的时候，实际上还承受着所有热压板自重的压力，因此压板张开要适当放慢速度，以防“鼓泡”2）影响胶合质量的因素:A.压力的影响压力过大，重者压溃被胶合的材料，破坏其自身的结构，轻者加大了热压时的压缩百分率，增大了材料的消耗，降低了竹材的利用率适宜的单位压力是保证胶合质量和材料利用率的重要因素目前生产中使用的单位压力是板坯的压缩率为随着竹片加工精度的提高，热压时的单位压力可
3.0-
3.5Mpa,13-16%,随之下降B.温度的影响温度是促使胶粘剂固化的重要条件热压胶合时，温度高可适当缩短胶合时间，但同时胶合板内的温差较大，内应力也较大,板子容易变形，另一方面同一压力条件下，温度越高,板坯的压缩率越大，则竹材的利用率越低，因此不能为了缩短热压时间，采用过高的热压温度，通常竹材胶合板生产中，的热压温度以PF为宜，的热压温度以为宜，压制厚胶合板时，温度应适当降低，135-140C UF115-120C单位压力适当增加C.时间的影响板坯在热压胶合过程中，所有胶层全部固化所需要的时间称为热压时间，其在工艺中的具体表现是热压板全部闭合达到工作压力开始至降压时为止的这段时间和在热压固化时会产生放热反应，因此生产上热压时间的确定一般PF UF可考虑在远离热压板的胶层固化率达到时，板子即可卸出热堆放，这样既能保证85%充分固化，又可节省热压时间，一般竹片板坯每厚度加热加压时间可以达1mm l.lmin到良好的胶合性能D.竹片质量主要指表面残留的竹青、竹黄量，竹片表面的光洁度，竹片的厚度偏差及竹片的含水率为宜）等表面质量直接影响到胶粘剂的用量,热压时的工（6-8%作压力，胶合强度3）热压胶合中产生的缺陷A.脱胶（部分或大面积相邻层竹片互相分离的现象）或胶合强度（胶合强度达不到标准规定的要求）低下（产生的原因有竹片含水率过高或部分竹片受潮；降压速度过快；胶粘剂变性或质量不符合要求；热压时间不足或温度偏低等）B.鼓泡（竹材胶合板热压过程中产生的局部脱胶现象）（主要原因是降压速度过快）C叠芯、离缝（装板时人为碰撞造成芯板移位而引起的）D.表面污染（压板表面不干净，组坯中胶液污染板面及人为污染面、背竹片）E.透胶（竹片厚度较大，一般不出现，但当竹片整体或局部含水率过高，易产生该现象）
18.竹编胶合板采用逐步升压工艺和分段降压工艺两种形式，前者是使胶粘剂在低压下流展渗透，以防止胶粘剂从竹席中挤出；后者则是为了防止鼓泡，并蒸发一部分水分19水煮（浸）一冰冻一干燥保存强度（简称为保存强度）是检验竹编胶合板胶合性能的指标，是在模拟加速老化后测定材料的静曲强度来表示的，它间接反映了板材胶层的胶合性能在水、温度的作用下的变化情况，也反映了材料在正常使用状态下，胶层和整个胶合材料的耐水、耐候性能竹材质量、竹席的含水率、竹席的编织质量、涂胶量、热压工艺等都与保存强度有关20^片浸胶及浸胶后的干燥是生产竹蔑积成胶合板的关键工序竹蔑积成胶合板与其它板的不同之处是含水率较高，产品较厚（多在25mm以上），故热压过程中排水困难，常采用热进冷出的热压工艺21竹材胶合板生产中提高竹材利用率的主要途径原料准备工序合理截断，严控余量；竹筒中心尽可能对准刀具中心，保证剖开竹片宽度相近压刨工序保证蒸煮软化、展平及辐压质量；控制单次刨削量，以尽量减少损失铳边工序控制铳削量组坯工序按照适当的压缩率确定正确的板坯厚度，并合理配置；严格遵守对称性原则，并保证〃一边一角一头齐〃；面、背板摆放时相互靠紧，防止人为叠、离而增加修补工作量，同时增加了材料消耗为什么要细胞破碎6细胞是生物体结构和功能的基本单位，通常人们所需的物质有些分泌于细胞外，如淀粉酶和蛋白酶等就是分泌细胞外的培养液中，用通常的溶剂可自接提取；有些则存在于细胞内，这类酶又有游离酶和结合酶之分，前者游离在细胞质中，后者则与细胞器紧密结合（如氧化还原酶和有机磷水解酶等）欲提取存在于细胞内的物质时、必须把细胞破碎细胞破碎的阻力跟细胞结构有关纯化方案是指在纯化某一物质过程中，将几种分离方法有机地互补联合、灵活应用的总称7它既是从各类材料中提取分离有效成分的前提，又是成功地达到纯化目的之保证纯化方案的评价8对纯化方案的评价，实质上是对组成纯化方案的每一种分离方法的评价，而这种评价仅采用理论分析是远远不够的，只有经过实践检验才能正确得出其方法是，对纯化过程的每一步收集到的溶液都要进行有效成分的含量测定，并将各自的比活力（活力单位数/毫克蛋白）、纯化倍数（每步的比活力/粗抽提液的比活力）和收得率计算出来视纯化倍数的大小，收得率的高低，就能初步确定每种分离方法的应用价值一般认为，凡是在特定实验中能增大纯化倍数和提高收得率的方法均属有应用价值的，反之，则应用价值不大实践中对纯化倍数和收得率的要求是依据材料来源的难易而变化的若材料来源难，就希望提高收得率；反之,则希望提高纯化倍数（见沉淀法）蛋白质纯度的鉴别标准9蛋白质和酶制品纯度鉴定通常采用的方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳法、等电聚焦电泳法、超SDS-速离心沉降分析法等蛋白质纯度的鉴别有下列几点要求蛋白质在不同条件下的电泳，均呈现一条分离区带pH蛋白质等电点聚焦电泳呈现一条分离带经纯化后的蛋白质，应不失其生物活性纯的蛋白质在超速离心力场中，以单一的沉降速度运动选用任何单独一种鉴定方法都不能最后确定蛋白质的纯度，必须同时采用种不同的方法才2-3能确定蛋白质含量的测定10蛋白质含量的测定是分离纯化工作中的重要部分蛋白质测定的方法有紫外吸收法利用芳香族氨基酸在的吸收作用280nm福林酚法（法）与福林试剂反应产生蓝色Folin染料结合法（法）与考马斯亮蓝反应产生蓝色Bradford G-250固体样品中蛋白质含量的测定，一般用凯氏定氮法核酸的纯度鉴定11一般采用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳，沉降分析和紫外吸收法（）等方法同A260/A280蛋白质一样，核酸纯度鉴定也必须采用种方法才能确定2-3核酸的提取12和在细胞中常与蛋白质结合，以核蛋白的形式存在DNA RNA的提取:一般是利用■核蛋白（）易溶于溶液而不溶于溶DNADNADNP lmol/L NaCI
0.14mol/L NaCI液的提取利用核蛋白（）易溶于溶液而不溶于溶液的RNA RNA-RNP
0.14mol/L NaCIlmol/L NaCI性质，先提取得到RNP提取得到或后，再将蛋白质除去即可得到相应的核酸DNP RNP蛋白质的去除可以选择去污剂法或有机溶剂法13去污剂法是利用等阴离子去污剂与蛋白质带正电荷的侧链结合，从而使核酸与蛋白质分开SDS然后加入浓醋酸钾溶液，使蛋白质复合物沉淀，并使多余的转化为溶解度小的钾盐而SDS-SDS同时沉淀有机溶剂法是利用酚、氯仿的混合液作蛋白质的变性剂，当它们与含核酸和蛋白质的水溶液一起振摇时形成乳状液，蛋白质因充分接触酚和氯仿而变性，与核酸分开离心后可分为两相，一般上层为含核酸的水相，下层为有机相，交界处是变性凝聚的蛋白质层最后利用乙醇或异丙醇讲核酸沉淀离心收集即可从除去混杂的可用将降解掉14RNA DNA,DNAase DNA从中除去混杂的可用将降解掉DNA RNA,RNAase RNA核酸样品进行精提纯，一般常用超离心、电泳、柱层析等方法15:超离心包括速度区带离心、沉降平衡超离心电泳包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、琼脂糖电泳前者凝胶孔径小，适合分离个核甘酸以下的核酸分子后者孔径大，适合分离较大1000的核酸分子柱层析主要有凝胶过滤柱层析、离子交换层析、羟基磷灰石柱层析第二章盐析法应用最广的还是在蛋白质领域，已有八十多年的历史，其突出的优点是1:
①成本低，不需要特别昂贵的设备
②操作简单、安全
③对许多生物活性物质具有稳定作用硫酸钱盐析2:固体法盐析后要在冰浴中放置一段时间，待沉淀完全后再离心与过滤在低浓度硫酸钱中盐析可采用离心分离，高浓度硫酸铉常用过滤方法各种饱和度下需加固体硫酸镂的量、计算法1X=G P2-P1/1-Ap2为经验常数，℃℃G0515,20513为常数℃℃A
00.
27200.
29、为初始和最终溶液的饱和度P2P1为溶液所需加入的硫酸镂的克数X1L、查表法2饱和溶液法表示需要加入硫酸镂溶液的体积；V ml表示原来溶剂的体积；Vo ml和含义同上；S1S2表示需要加入硫酸铁溶液的饱和度（一般用百分之百）S3有机溶剂沉淀法的优点是3:
①分辨能力比盐析法高，即一种蛋白质或其他溶质只在一个比较窄的有机溶剂浓度范围内沉淀
②沉淀不用脱盐，过滤比较容易（如有必要，可用透析袋脱有机溶剂）因而在生化制备中有广泛的应用其缺点对某些具有生物活性的大分子容易引起变性失活，操作需在低温下进行有机溶剂沉淀法的操作与硫酸钱盐析法相似盐析法的注意事项在这里同样适用此外，还4有几点需要指出⑴低温下操作由于有机溶剂加入水溶液时产生放热反应会引起蛋白质变性，因此必须把所用之有机溶剂预冷至一℃而且整个操作要在低温下进行10,（）中性盐作用加入适量的中性盐能增加蛋白质在有机溶剂中的溶解度，可降低有机溶2剂对蛋白质的变性作用，同时还可提高分级效果但是，加入的量过多，则可引起蛋白质析出，影响有机溶剂的分级作用因此，用有机溶剂沉淀蛋白质时，宜在稀盐溶液或低浓度缓冲液中进行（）多价阳离子作用有些蛋白质和多价阳离子（如、等）能结合形成复3Zn2+Cu2+合物，致使蛋白质在有机溶剂中的溶解度降低这对在高浓度溶剂中才能沉淀的蛋白质特别有、乙血第三章色谱法的优点和缺点1:色谱法的优点分离效率高几十种甚至上百种性质类似的化合物可在同一根色谱柱上得到分离，能解决许多其他分析方法无能为力的复杂样品分析分析速度快一般而言，色谱法可在几分钟至几十分钟的时间内完成一个复杂样品的分析检测灵敏度高随着信号处理和检测器制作技术的进步，不经过预浓缩可以直接检测10-9g级的微量物质如采用预浓缩技术，检测下限可以达到；数量级102g样品用量少一次分析通常只需数纳升至数微升的溶液样品选择性好通过选择合适的分离模式和检测方法，可以只分离或检测感兴趣的部分物质多组分同时分析在很短的时间内（左右），可以实现几十种成分的同时分离与定20min量易于自动化现在的色谱仪器已经可以实现从进样到数据处理的全自动化操作▲色谱法的缺点定性能力较差为克服这一缺点，已经发展起来了色谱法与其他多种具有定性能力的分析技术的联用按层析过程的机理分类2分配层析溶解度离子交换层析带电性，静电引力吸附层析吸附力亲和层析配体专一性凝胶层析分子大小按操作形式不同分类3:柱层析将固定相装于柱内，使样品沿一个方向移动而达到分离纸层析用滤纸做液体的载体，点样后，用流动相展开，以达到分离鉴定的目的薄层层析将适当粒度的吸附剂铺成薄层，以纸层析类似的方法进行物质的分离和鉴定以上划分无严格界限，有些名称相互交叉，如亲和层析应属于一种特殊的吸附层析，纸层析是一种分配层析，柱层析可做各种层析吸附剂的选择4共性吸附剂应具备表面积大、颗粒均匀、吸附选择性好、稳定性强和成本低廉等性能个性在选择具体吸附剂时，主要是根据吸附剂本身和被吸附物质的理化性质进行的一般来说，极性强的吸附剂易吸附极性强的物质，非极性的吸附剂易吸附非极性的物质但是为了便于解吸附，对于极性大的分离物，应选择极性小的吸附剂否则反之要选择一个理想的吸附剂必须经过多次试验才能获得吸附剂的性质5:前处理先过筛，除去大的颗粒，或者用悬浮法除去细小颗粒，然后用酸、碱等溶液浸泡,接着用沸水煮，清水洗，最后用有机溶液如甲醇处理，得到既无杂质、颗粒又均一的吸附剂薄层层析有以下优点6:展层时间短，薄层层析分离混合物一般仅需；
1.15~60min设备简单、操作方便，既适用于分析，也适用于制备；
2.温度变化和溶剂饱和程度对值影响较小；
3.R可使用腐蚀性显色剂（用淀粉作黏合剂和葡聚糖凝胶作固定相的薄板除外）；
4.灵敏度高
5.薄层层析的缺点对生物高分子的分离效果不甚理想薄层的几种类型7:不加粘合剂的薄层涂布法（）氧化铝薄层1（）纤维素薄层2（）聚酰胺薄层3加粘合剂薄层的涂布法硅胶薄层G硅胶（）竣甲基纤维钠（）薄层H CMC-Na特殊薄层酸、碱薄层和缓冲薄层pH络合薄层薄层层析注意事项8:吸附剂的颗粒均匀度和大小a.薄层要均一，厚度应适中薄层厚度一般控制在之间b.加水量应视硅胶批号、来源而定c.如果薄层层析所用的支持剂是吸附剂，在同一吸附剂上，不同化合物的吸附性9质有如下规律
①饱和碳氢化合物不易被吸附；
②不饱和碳氢化合物易被吸附，分子中双键愈多，则吸附得愈紧密；
③当碳氢化合物被一个功能基取代后，吸附性增大吸附性较大的化合物，一般需用极性较大的溶剂才能推动它选择展开剂的另一个依据是溶剂的极性大小一般而论，在同一种支持剂上，凡溶剂的极10性愈大，则对同一性质的化合物的洗脱能力也愈大，即在薄层上能把此化合物推进得愈远，Rf值也愈大如果用一种溶剂去展开某一成分，当发现它的值太小时，可考虑换用一种极性较Rf大的溶剂，或在原来的溶剂中加入一定量极性较大的溶剂进行层析溶剂极性大小的次序是石油醛〈二硫化碳〈四氯化碳〈三氯乙烯＜苯＜二氯甲烷〈氯仿〈乙醛〈乙酸乙酯〈乙酸甲酯〈丙酮＜正丙醇〈甲醇〈水的通用显色方法11:TLC理想的显色希望灵敏度高、斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好、斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比在样品组成并不完全已知的情况下，通用显色方法显得成尤为重要通用显色法主要有、紫外照射法方便，不破坏样品；
1、碘蒸气法通用性强，与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用；
2、荧光试剂制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显；、34硫酸溶液对绝大多数有机物有效，但有破坏性定性与定量分析12:定性通过薄层层析被分离的各种溶质组分在滤纸上移动的速率通常用表示Rf组分移动的距离/溶剂前沿移动的距离1^==原点至组分斑点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离在薄层、溶剂、温度等各项实验条件恒定的情况下，各物质的值是不变的，它不随溶剂Rf移动距离的改变而变化与分配系数的关系是由薄层性质决定的一个常数Rf K Rf=l/l+a K,a由此可见，值愈大，溶质分配于固定相的趋势愈大，而值愈小；反之，值愈小，则分配KRfK于流动相的趋势愈大，值是定性分析的重要指标Rf薄层层析在定量分析时需注意以下几点13在喷雾显色时，不加粘合剂的薄层要小心操作，以免吹散吸附剂1⑵薄层层析还可以用强腐蚀性显色剂，如硫酸、硝酸、倍酸或其他混合溶液这些显色剂几乎可以使所有的有机化合物转变为碳，如果支持剂是无机吸附剂，薄层板经此类显色剂喷雾后，被分离的有机物斑点即显示黑色此类显色剂不适用于定量测定或制备用的薄层上如果样品斑点本身在紫外光下不显荧光，可采用荧光薄层检测法，即在吸附剂中加入3荧光物质，或在制备好的薄层上喷雾荧光物质，制成荧光薄层这样在紫外光下薄层本身显示荧光，而样品斑点不显荧光吸附剂中加入的荧光物质常用的有硅酸锌镉粉，或在薄层上L5%喷雾荧光素钠、硫酸奎宁醇溶液或磺基水杨酸的丙酮溶液
0.04%
0.5%1%⑷由于薄层边缘含水量不一致，薄层的厚度、溶剂展开距离的增大，均会影响值，因此在鉴Rf定样品的某一成分时，应用已知标准样作对照定量时，可对斑点作光密度测定；也可将一个斑点显色，而将与其相同值的另一未显色5Rf斑点从薄层板上连同吸附剂一起刮下，然后用适当的溶剂将被分离的物质从吸附剂上洗脱下来，进行定量测定第五章离子交换层析是利用离子交换剂上的可交换离子与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力1:不同，经过交换平衡达到分离的目的的一种柱层析法离子交换层析具有灵敏度高，重复性、选择性好，分析速度快等优点，是当前最常用的层析法之一影响离子交换选择性的因素2:水合离子半径半径越小，亲和力越大；离子化合价高价离子易于被吸附；溶液影响交换基团和交换离子的解离程度，不但影响交换容量；对交换选择性影响亦大pH离子强度越低越好；有机溶剂不利于吸附；交联度、膨胀度、分子筛交联度大，膨胀度小，筛分能力增大；交联度小，膨胀度大，吸附量减少；树脂与粒子间的辅助力除静电力以外，还有氢键和范德华力等辅助力；影响交换速度的因素3:颗粒大小愈小越快交联度交联度小，交换速度快温度越高越快,与扩散系数增加有关离子化合价化合价越高，扩散速度小离子大小越小越快搅拌速度在一定程度上，越大越快溶液浓度当交换速度为外扩散控制时，浓度越大，交换速度越快离子交换层析的基本原理4:若选择阳离子交换树脂，则带正电荷的物质与发生交换而结合在树脂上若选择阴离子交H+换树脂，则带负电荷的物质可与发生交换而结合在树脂上0H-物质在树脂上结合的牢固程度有差异，选用适当的洗脱液可将混合物中的组分逐个洗脱下来，达到分离纯化的目的+图5-2P65离子交换剂性质5:书124P72膨胀度吸水量3膨胀度每干胶在水或其他规定的溶剂中，在一定时间与温度条件下膨胀后所占有g的体积毫升数影响膨胀度的因素有、基质
1、电荷基团
2、离子强度和值3pH选择离子交换剂的一般原则如下6阴、阳离子交换剂选择1如果被分离物质带正电荷，应选择阳离子交换剂；如带负电荷，应选择阴离子交换剂；如被分离物为两性离子，则一般应根据其在稳定范围内所带电荷的性质来选择交换剂的种pH类强、弱离子交换剂选择2强型离子交换剂适用的范围很广，常用来制备去离子水和分离一些在极端溶液pH pH中解离且较稳定的物质弱型离子交换剂适用范围狭窄，在为中性的溶液中交换容量高，pH pH用它分离生命大分子物质时，其活性不易丧失不同离子型交换剂的选择3离子交换剂处于电中性时常带有一定的反离子，使用时选择何种离子交换剂，取决于交换剂对各种反离子的结合力为了提高交换容量，一般应选择结合力较小的反离子据此，强酸型和强碱型离子交换剂应分别选择型和型；弱酸型和弱碱型交换剂应分别选择型H0H Na和型CI另外还要保证平衡离子不对样品组分有明显影响因为在分离过程中，平衡离子被置换到流动相中，它不能对样品组分有污染或破坏如在制备过程中用到的离子交换剂的平衡离子是或离子，因为其它离子都会对纯水有污染但是在分离蛋白质时，一般不能使用或H0H H型离子交换剂，因为分离过程中或离子被置换出来都会改变层析柱内值，影响分离0H H0H pH效果，甚至引起蛋白质的变性⑷不同基质离子交换剂的选择交换剂的基质是疏水性还是亲水性，对被分离物质的稳定性和分离效果均有影响一般认为，在分离生命大分子物质时，选用亲水性基质的交换剂较为合适，它们对被分离物质的吸附和洗脱都比较温和，活性不易破坏生化用离子交换剂的特点7:、亲水性和生物相容性
1、孔结构
2、电荷密度
3、粒度
4、纯度5生化用离子交换剂的种类8:生化专用离子交换剂、纤维素类
1、葡聚糖系离子交换剂2Sephadex琼脂糖系离子交换剂等第七章亲和层析原理1:生物亲和作用生物物质具有识别特定物质并与该物质的分子相结合的能力这种识别并结合的能力具有排他性能区分结构和性质非常相近的其它分子亲和层析是利用生物大分子具有对一类生物大分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种分离的色谱方法，也叫做生物亲和或生物特异性亲和色谱亲和的一对分子中的一方以共价键形式与不溶性载体相连作为固定相吸附剂当含有混合组份的样品流动相通过此固定相时•，只有和固定相分子有特异亲和力的物质，才能被固定相吸附结合，其它没有亲和力的无关组份就随流动相流出然后改变流动组成份，将结合的亲和物洗脱下来亲和吸附介质基质+配体图P1143:亲和作用的机理
2、
1、结构特点必要条件存在凹陷和凸起结构钥匙和锁孔的关系
1、
2、相互作用力的存在
2、3静电作用、4氢键、5疏水性相互作用、6配位键4:弱共价键、
1、影响亲和作用的因素
2、
3、
4、
5、6离子强度一般来说，提高离子强度，亲和作用减弱或完成破坏在适当的下，亲和结合作用较高，在其它下，亲和作用减弱或完成破坏PH PHPH抑制氢键形成的物质月尿和盐酸呱的存在可减弱亲和作用温度提高温度，静电作用、氢键、配位键减弱；但是，疏水性相互作用增强液体离子、「、-的存在，疏水性相互作用减弱SCN-4螯合剂影响配位键，使亲和作用消失亲和层析的基本特点纯化过程简单、迅速，且分离效率高特别适用于分离纯化一些含量低、稳定性差的生物大分子纯化倍数大，产物纯度高必须针对某一分离对象制备专一的配基及寻求稳定的层析条件价格相对较昂贵；在洗脱中，交联在层析介质上的配基可能脱落并进入产品中，从而造成不良影响，如抗体、染料等配基配体的选择5:配体与待分离的物质有适当的亲和力配体与待分离的物质之间的亲和力要有较强的特异性，配体要能够与基质稳定的共价结合，在实验过程中不易脱落，配体自身应具有较好的稳定性，活化
61.基质的活化是指通过对基质进行一定的化学处理，使基质表面上的一些化学基团转变为易于和特定配体结合的活性基团、漠化睛活化法1澳化鼠活化法是最常用的活化方法之一，活化过程主要是生成亚胺碳酸活性基团，它可以和伯氨反应，主要生成异胭衍生物反应如下NH2里幽+CNBr gel%=NH+RNH,gel_NH这种方法的缺点是澳化鼠活化法的基质和配体偶联后生成的异版衍生物中氨基的所pKa=
10.4,以通常会带一定的正电荷，从而使基质可能有阴离子离子交换作用，增大了非特异性吸附，影响亲和层析的分辨率另外滨化氟活化的基质与配体结合不够稳定，尤其是当与小配体结合时，可能会出现配体脱落现象另外澳化富有剧毒、易挥发，所以操作不便。
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