文本内容:
改良氏法测定蛋白质含量Lowry改良Lowry氏法测定蛋白质含量
一、实验原理蛋白质是生物体内重要的生物大分子,其含量的准确测定对于研究生物体的生理功能和代谢过程具有重要意义Lowry氏法是一种常用的蛋白质测定方法,其原理是在碱性条件下,蛋白质与铜离子形成紫色络合物,通过比色法测定其吸光度,从而计算蛋白质浓度改良Lowry氏法在传统Lowry氏法的基础上进行了优化,提高了测定准确性和灵敏度
二、实验步骤
1.试剂准备1试齐I」A称取2g Na2C
03、
0.4g NaOH和
0.2g CuS04-5H20,溶于100ml蒸储水中2试剂B称取lg NaOH和2g Na2C03,溶于100ml蒸储水中3Fol in-酚试剂称取
0.5g鸨酸钠、1g铝酸钠和
0.5g硫酸锂,溶于100ml蒸储水中,加入10ml85%磷酸和5nli浓盐酸,充分混合后置于4℃冰箱保存使用前加入等体积的2N NaOH溶液
2.样品处理将待测蛋白质样品用蒸储水稀释适当倍数,使蛋白质含量在适宜范围内
3.实验操作1取7支试管,按下表加入试剂:试管号1234567000000蒸一水ml—.
5.
5.
5.
5.
5.5试管号1234567000000试样ml—.
1.
2.
3.
5.
5.4试剂A ml1111111试剂B ml11111110000000Fol in-酚试剂ml.
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5.
5.
5.
5.
5.52将试管充分混合后,置于37℃水浴中反应15分钟3以空白管为对照,用比色皿在660nm波长下测定各管吸光度值4以蛋白质质量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线根据标准曲线计算样品中蛋白质浓度
三、注意事项
1.实验中所用玻璃器皿应清洁干燥,避免污染
2.Fol in-酚试剂应现配现用,避免长时间放置
3.在加入Folin-酚试剂后,应立即混合均匀并置于水浴中反应,避免延迟反应时间
4.比色皿在使用前应用蒸储水清洗干净,并用干净纸巾擦干
5.在测定吸光度值时,应保证比色皿光路对准,避免误差
四、实验结果与分析根据实验所得数据,绘制标准曲线,得到回归方程将样品吸光度值代入回归方程,即可计算样品中蛋白质浓度通过与传统Lowry氏法的比较,可以发现改良Lowry氏法具有更高的准确性和灵敏度。