文本内容:
山大生化实验报告实验七紫外吸收法测蛋白质浓度实验七紫外吸收法测蛋白质浓度
一、实验目的
1.掌握紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理和方法
2.学习使用紫外分光光度计进行定量分析
3.了解蛋白质的性质和特点
二、实验原理紫外吸收法是一种常用的蛋白质定量方法蛋白质分子中的色氨酸和酪氨酸在紫外光区有明显的吸收峰,根据朗伯-比尔定律,吸光度与蛋白质浓度成正比因此,通过测量溶液在特定波长下的吸光度,可以计算出蛋白质浓度
三、实验步骤
1.准备试剂和仪器
0.IM NaOH溶液、
0.01M HC1溶液、标准蛋白质溶液(已知浓度)、未知蛋白质溶液、紫外分光光度计、比色皿
2.将未知蛋白质溶液与
0.IM NaOH溶液按照1:1体积比混合,充分摇匀
3.用
0.01M HC1溶液调节混合液pH至
4.65左右,注意控制酸碱误差在±
0.03pH单位内
4.用紫外分光光度计测定混合液在280nm和260nm处的吸光度A280和A
2605.根据公式C=m/(A280-A260),计算未知蛋白质溶液浓度(m为样品质量)
四、实验结果与数据分析已知标准蛋白质溶液浓度为lmg/mL,未知蛋白质溶液吸光度如下表所示A2A2样品A280/A260浓度mg/mL8060A2A2样品A280/A260浓度mg/mL
80601.
0.标准蛋白质溶液
3.
001.
0035451.
0.■未知蛋白质溶液
2.181555根据公式CWA280-A260,计算未知蛋白质溶液浓度:标准蛋白质溶液浓度Cstandard=lmg/mL未知蛋白质溶液吸光度比A280/A260=
2.18未知蛋白质溶液浓度Cunknown=Cstandard*A280/A260/A280/A260standard=1*
2.18/
3.00=
0.79mg/mL
五、结论通过紫外吸收法测定,未知蛋白质溶液的浓度为
0.79mg/mLo本实验掌握了紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理和方法,并成功应用于实际样品测定然而,需要注意的是,由于实验过程中存在误差,建议多次测定取平均值以获得更准确的结果此外,紫外吸收法仅适用于低分子量蛋白质的测定,对于高分子量蛋白质和复合蛋白质,可能需要其他方法进行定量分析。