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抗氧化剂抗氧化活性的测定方法一抗氧化剂的抗氧化活性通常是通过其抑制或减缓食品或生物体系中氧化反应的能力来评估的以下是几种常见的抗氧化剂抗氧化活性的测定方法
1.铁离子还原能力测定(FRAP法)o原理铁离子在pH
3.6的醋酸盐缓冲液中被抗氧化剂还原为亚铁离子,通过比色法测定生成的亚铁离子的浓度,从而评估抗氧化剂的还原能力o操作流程将抗氧化剂样品溶液与铁离子溶液混合,置于37水浴中反应一段时间后,加入三氯乙酸终止反应,再加入氯化铁显色液,最后用紫外-可见分光光度计测定吸光度o数据分析通过对比不同浓度抗氧化剂样品的吸光度,可以得出样品的抗氧化活性
2.抗氧自由基能力测定(ORAC法)o原理通过荧光光度计测定抗氧化剂在特定位点上淬灭自由基的能力,从而评估抗氧化剂的抗氧自由基能力o操作流程将抗氧化剂样品溶液与自由基溶液混合,置于荧光光度计中反应一段时间后,加入淬灭剂终止反应,记录荧光强度数据分析通过对比不同浓度抗氧化剂样品的荧光强度,可以得O出样品的抗氧化活性
3.超氧阴离子自由基清除能力测定(SOD法)o原理通过黄喋吟和黄喋吟氧化酶体系产生超氧阴离子自由基,抗氧化剂能够清除超氧阴离子自由基,从而减缓过氧化氢的产生通过比色法测定过氧化氢的生成量,可以评估抗氧化剂的抗超氧阴离子自由基能力o操作流程将抗氧化剂样品溶液与黄喋吟-黄口票吟氧化酶混合液反应一段时间后,加入过氧化氢显色液,最后用紫外-可见分光光度计测定吸光度数据分析通过对比不同浓度抗氧化剂样品的吸光度,可以得出O样品的抗氧化活性
4.细胞抗氧化能力测定o原理通过细胞培养技术,将抗氧化剂添加到细胞培养液中,培养一段时间后,通过荧光或化学发光等检测方法测定细胞内的氧化水平或R0S水平,从而评估抗氧化剂的细胞抗氧化能力o操作流程将细胞接种在培养皿中,加入含有或不含有抗氧化剂的培养液,培养一定时间后,根据具体检测方法加入对应的检测试剂o数据分析通过对比加药与不加药细胞的荧光或化学发光强度,可以得出样品的细胞抗氧化活性
5.体内抗氧化能力测定对于体内抗氧化能力的测定,通常是通过动物模型进行的常用的动物模型有衰老模型、急性氧化应激模型、慢性氧化应激模型等给药一定时间后,通过生化分析、病理学检查等方法测定动物的体内氧化指标或组织器官损伤情况,从而评估抗氧化剂的体内抗氧化能力。