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紫外分光光度计使用范文一紫外分光光度计的使用分光光度计分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链,以及核酸在波长处有最高吸收峰吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的,所以嘌呤和dna rna260nm嘧啶以及一切含有它们的物质,不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性但紫外法不能区分和,只能用来鉴定核酸的纯度和含量蛋白质由于含有芳香氨基酸,因此也能吸收紫外光通常蛋白质的吸收高峰在dna rna波长处,在处的吸收值公为核酸的十分之一或更低,故核酸样品中蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大的与吸收的比280nm260nm值在以上;的与吸收的比值则在左右当样品中蛋白rna260nm280nm质含量较高时比值即下降
2.0dna260nm280nm
1.9分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度样品的吸光值与样品的浓度成正比核酸的定量和都有吸收紫外光的性质,它们的吸收高峰在波长处,每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同定量不同类型的核酸,事先要选择对应的dna rna260nm系数如的吸光值分别相当于的,的,的,的寡核苷酸测试后的吸光值经过上述系数的换算,从1od50μg/ml dsdna37μg/ml ssdna而得出相应的样品浓度,这些由分光光度计内预设的程序执行,因此,测试前选择40μg/ml rna30μg/ml正确的程序,测试样品的类型,首先测试空白液,然后再测试样品,注意输入样品稀释倍数如何避免吸光值漂移读数不稳定可能是实验者最头痛的问题灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和精确度核酸本身物化性质溶解核酸的缓冲液的值、离子浓度等在测试时,离子浓度太高也会导致读数漂移,因此建议使用值一定、离子浓度ph较低的缓冲液(如)可大大稳定读数核酸的吸光值受值和缓冲液离子浓度ph影响只有在一定的值和低离子浓度的条件下(如),才te ph能得到精确的检测结果水的值不稳定,可能导致检测误差一些缓冲液在紫ph10mmtris-hclph
8.0ph外范围内存在自身吸收,为了确保准确测量,请使用与悬浮或洗脱样品时相同的缓冲液样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素,由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品这些小颗粒的存在干扰测试效果为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于,吸光值最好在在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高(超过光度计的
0.1a
0.1-
1.5a测试范围)操作因素如混合要充分,否则吸光值太低,甚至出现负值;混合液不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项各波长具体含义及相关问题是核酸最高吸收峰的吸收波长,最佳测量值的范围为至如果不在此范
1.a260nm围,稀释或浓缩样品,使之在此范围内;如果吸光度小于,检查是否存在操
0.
11.0作因素(如移液不准确,样品内有悬浮物等)影响样品的吸光度值是
0.05否(请注意,这个值跟仪器无关,核酸的吸光度必需大于,其值才有效dna a260和可靠,因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收,其值
0.
10.1朗伯-比尔定律吸光值入射光强度a投射光强度i0吸光物质的摩尔浓度()i光通过的液层厚度()c mol/l摩尔吸光系数()d cmεlmol-1cm-1是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估纯
2.a280nm的比值为,纯为如果比值低,表示受到蛋白(芳香族)dna或酚类物质的污染,需要纯化样品比值相当于%蛋白质溶液a260/a
2801.8rna
2.0=
1.550/dna
3.a230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估纯和的比值为若比值小于标明样品被碳水化合物(糖类)、dna盐类或有机溶剂污染,需要纯化样品产生负值主要是由于在很低浓度rna a260/a
2302.
52.0的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的在下一个测定中,需要降低样品的稀释a230dna度,的负值会被校正或a230为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子该值应该接近如果不是,标明溶液
4.a320nm a340nm中有悬浮物,需要纯化样品纯样品的一般是
0.0和a3200是核酸纯度的指示值,纯度好的,在下其比值应该在或,
5.a260/a280a260/a230的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是纯净的dna ph7-
8.
52.
02.5样品比值大于()或者()如果比值低于或者,表示存在a260/a280280nm蛋白质或者酚类物质的影响是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的
1.8dna
2.0rna
1.
82.0吸光度,表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物、多肽、苯酚等,较纯a230净的核酸的比值大于是蛋白质的吸光度a230分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器常用于核酸,蛋白定量以及细a260/a
2302.0a280菌生长浓度的定量分光光度计的简单原理分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度样品的吸光值与样品的浓度成正比核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链,以及核酸的最高吸收峰的吸收波长每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系dna rna260nm数如的吸光值分别相当于的,的,的,的测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得1od50μg/ml dsdna37μg/ml ssdna出相应的样品浓度测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测40μg/ml rna30μg/ml olig试空白液和样品液然而,实验并非一帆风顺读数不稳定可能是实验者最头痛的问题灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和精确度如的准确度()这样多次测试的结果在均值左右之间变动,都是正常的另外,还eppendorfbiophotometer≤
1.0%需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的值,离子浓度等在测试时,1a
1.0%离子浓度太高,也会导致读数漂移,因此建议使用值一定、离子浓度较低的缓phph冲液,如,可大大稳定读数样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品这些小颗粒的存在干扰测试te效果为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于,吸光值最好在在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高(超过光度计的测试范围)最后是操
0.1a
0.1-
1.5a作因素,如混合要充分,否则吸光值太低,甚至出现负值;混合液不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项除了核酸浓度,分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是纯净的样品,比值大于a260/a280280nm()或者()如果比值低于或者,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚
1.8dna
2.0rna
1.
82.0等,较纯净的核酸的比值大于检测溶液的混浊度和其他干a230扰因子纯样品,一般是a260/a
2302.0a320蛋白质的直接定量(法)a3200这种方法是在波长,直接测试蛋白选择公式,光度计可以直接uv显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度280nm warburg蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质由于缓冲液中存在一些杂质,一般要消除的背景信息,设定此功能开与测试核酸类似,要求的吸光值至少大于,最佳的线性范围在之间实验中320nm“”“”选择公式显示样品浓度时,发现读数漂移这是一个正常的现象事实a
2800.1a
1.0-
1.5上,只要观察的吸光值的变化范围不超过,表明结果非常稳定warburg“”漂移的原因是因为公式吸光值换算成浓度,乘以一定的系数,只要吸光a2801%值有少许改变,浓度就会被放大,从而显得结果很不稳定warburg蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高dna比色法蛋白质定量蛋白质通常是多种蛋白质的化合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度比色方法一般有,,等几种方法bca bradfordlowry法以最早期的反应为基础,并有所改进蛋白质与反应,产生蓝色的反应物但是与相比,法敏感性更高缺点是需要顺序加入lowry biuretcu2+几种不同的反应试剂;反应需要的时间较长;容易受到非蛋白物质的影响;含biuret lowry,,等物质的蛋白不适合此种方法()法这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法要分edta tritonx-100ammoniasulfate析的蛋白在碱性溶液里与反应产生,后者与形成螯合物,形成紫色bca bicinchoninineacidassay化合物,吸收峰在波长此化合物与蛋白浓度的线性关系极强,反应后形cu2+cu+bca成的化合物非常稳定相对于法,操作简单,敏感度高但是与法562nm相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰lowry lowry法这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应,产生的有色化合物吸收峰其最大的特点是,敏感度好,是和两种测试方法的bradford倍;操作更简单,速度更快;只需要一种反应试剂;化合物可以稳定小时,方595nm lowry bca便结果;而且与一系列干扰,反应的还原剂(如,巯基乙醇)相21容但是对于去污剂依然是敏感的最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品lowry bcadtt的结果差异较大,无可比性某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致,感到迷惑,究竟该相信哪种方法由于各种方法反应的基团以及显色基团不一,所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性例如等测试人奶中的蛋白,结果,测出的浓度明显高于,差异显著即使是测定同keller一样品,同一种比色法选择的标准样品不一致,测试后的浓度也不一致如用lowry bca bradford测试细胞匀浆中的蛋白质,以作标准品,浓度,以球蛋白作标准品,浓度因此,在选择比色法之前,最好是参照要测试的样lowry bsa
1.34mg/ml a本的化学构成,寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品另外,比色法定量蛋白
2.64mg/ml质,经常出现的问题是样品的吸光值太低,导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大关键问题是,反应后的颜色是有一定的半衰期,所以每种比色法都列出了反应测试时间,所有的样品(包括标准样品),都必须在此时间内测试时间过长,得到的吸光值变小,换算的浓度值降低除此,反应温度、溶液值等都是影响实验的重要原因此外,非常重要的是,最好是用塑料的比色法避免ph使用石英或者玻璃材质的比色杯,因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色,导致样品吸光值不准确细菌细胞密度()实验室确定细菌生长密度和生长期,多根据经验和目测推断细菌的生长密度在遇od600到要求较高的实验,需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法以未加菌液的培养液作为空白液,之后定量od600培养后的含菌培养液为了保证正确操作,必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数,做出校正曲线实验中偶尔会出现菌液的值出现负值,原因是采用了显色的培养基,即细菌培养一段时间后,与培养基反应,发生变色反应od另外,需要注意的是,测试的样品不能离心,保持细菌悬浮状态分光光度计的重要配件比色杯比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯根据不同的测量体积,有比——色杯和毛细比色杯等一般测试核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不适合比色法测定因为反应中的染料(如考马斯亮兰)能让石英和玻璃着色,所以必须采用一次性的塑料杯而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品由于另外测试的样品量不同,所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量,亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯,样品用量仅需,比色杯单个无菌包装,可以回收样品如塑料比色杯,是目前比色杯市场上一个革新随50μl着生命科学以及相关学科发展,对此类科学的实验研究提出更高的要求,分光光度eppendorfuvette计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器,也成为微生物、食品、制药等相关实验室的必备设备之一原文地址分光光度计http分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器常用于核酸,蛋白定量以及细//fanwen.wenku
1.com/article/
22994441.html菌生长浓度的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链,以及核酸在波长处有最高吸收峰吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的,所以嘌呤和dna rna260nm嘧啶以及一切含有它们的物质,不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性但紫外法不能区分和,只能用来鉴定核酸的纯度和含量蛋白质由于含有芳香氨基酸,因此也能吸收紫外光通常蛋白质的吸收高峰在dna rna波长处,在处的吸收值公为核酸的十分之一或更低,故核酸样品中蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大的与吸收的比280nm260nm值在以上;的与吸收的比值则在左右当样品中蛋白rna260nm280nm质含量较高时比值即下降
2.0dna260nm280nm
1.9分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度样品的吸光值与样品的浓度成正比核酸的定量和都有吸收紫外光的性质,它们的吸收高峰在波长处,每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同定量不同类型的核酸,事先要选择对应的dna rna260nm系数如的吸光值分别相当于的,的,的,的寡核苷酸测试后的吸光值经过上述系数的换算,从1od50μg/ml dsdna37μg/ml ssdna而得出相应的样品浓度,这些由分光光度计内预设的程序执行,因此,测试前选择40μg/ml rna30μg/ml正确的程序,测试样品的类型,首先测试空白液,然后再测试样品,注意输入样品稀释倍数如何避免吸光值漂移读数不稳定可能是实验者最头痛的问题灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和精确度核酸本身物化性质溶解核酸的缓冲液的值、离子浓度等在测试时,离子浓度太高也会导致读数漂移,因此建议使用值一定、离子浓度ph较低的缓冲液(如)可大大稳定读数核酸的吸光值受值和缓冲液离子浓度ph影响只有在一定的值和低离子浓度的条件下(如),才te ph能得到精确的检测结果水的值不稳定,可能导致检测误差一些缓冲液在紫ph10mmtris-hclph
8.0外范围内存在自身吸收,为了确保准确测量,请使用与悬浮或洗脱样品时相同的缓ph冲液样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素,由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品这些小颗粒的存在干扰测试效果为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于,吸光值最好在在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高(超过光度计的
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1.5a测试范围)操作因素如混合要充分,否则吸光值太低,甚至出现负值;混合液不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项各波长具体含义及相关问题是核酸最高吸收峰的吸收波长,最佳测量值的范围为至如果不在此范
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0.
11.0作因素(如移液不准确,样品内有悬浮物等)影响样品的吸光度值是
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0.
10.1朗伯-比尔定律吸光值入射光强度a投射光强度i0i吸光物质的摩尔浓度()光通过的液层厚度()c mol/l摩尔吸光系数()d cmεlmol-1cm-1是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估纯
2.a280nm的比值为,纯为如果比值低,表示受到蛋白(芳香族)dna或酚类物质的污染,需要纯化样品比值相当于%蛋白质溶液a260/a
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1.550/dna是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估纯和
3.a230nm的比值为若比值小于标明样品被碳水化合物(糖类)、dna盐类或有机溶剂污染,需要纯化样品产生负值主要是由于在很低浓度rna a260/a
2302.
52.0的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的在下一个测定中,需要降低样品的稀释a230dna度,的负值会被校正或a230为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子该值应该接近如果不是,标明溶液
4.a320nm a340nm中有悬浮物,需要纯化样品纯样品的一般是
0.0和a3200是核酸纯度的指示值,纯度好的,在下其比值应该在或,
5.a260/a280a260/a230的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是纯净的dna ph7-
8.
52.
02.5样品比值大于()或者()如果比值低于或者,表示存在a260/a280280nm蛋白质或者酚类物质的影响是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的
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1.
82.0吸光度,表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物、多肽、苯酚等,较纯a230净的核酸的比值大于是蛋白质的吸光度a230分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器常用于核酸,蛋白定量以及细a260/a
2302.0a280菌生长浓度的定量分光光度计的简单原理分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度样品的吸光值与样品的浓度成正比核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链,以及核酸的最高吸收峰的吸收波长每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系dna rna260nm数如的吸光值分别相当于的,的,的,的测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得1od50μg/ml dsdna37μg/ml ssdna出相应的样品浓度测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测40μg/ml rna30μg/ml olig试空白液和样品液然而,实验并非一帆风顺读数不稳定可能是实验者最头痛的问题灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和精确度如的准确度()这样多次测试的结果在均值左右之间变动,都是正常的另外,还eppendorfbiophotometer≤
1.0%需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的值,离子浓度等在测试时,1a
1.0%离子浓度太高,也会导致读数漂移,因此建议使用值一定、离子浓度较低的缓ph冲液,如,可大大稳定读数样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素由于样ph品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品这些小颗粒的存在干扰测试te效果为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于,吸光值最好在在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高(超过光度计的测试范围)最后是操
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2302.0a320蛋白质的直接定量(法)a3200这种方法是在波长,直接测试蛋白选择公式,光度计可以直接uv显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度280nm warburg蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质由于缓冲液中存在一些杂质,一般要消除的背景信息,设定此功能开与测试核酸类似,要求的吸光值至少大于,最佳的线性范围在之间实验中320nm“”“”选择公式显示样品浓度时,发现读数漂移这是一个正常的现象事实a
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1.5上,只要观察的吸光值的变化范围不超过,表明结果非常稳定warburg“”漂移的原因是因为公式吸光值换算成浓度,乘以一定的系数,只要吸光a2801%值有少许改变,浓度就会被放大,从而显得结果很不稳定warburg蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高dna比色法蛋白质定量蛋白质通常是多种蛋白质的化合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度比色方法一般有,,等几种方法法以最早期的反应为基础,并有所改进蛋白质与反应,产bca bradfordlowry生蓝色的反应物但是与相比,法敏感性更高缺点是需要顺序加入lowry biuretcu2+几种不同的反应试剂;反应需要的时间较长;容易受到非蛋白物质的影响;含biuret lowry,,等物质的蛋白不适合此种方法()法这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法要分edta tritonx-100ammoniasulfate析的蛋白在碱性溶液里与反应产生,后者与形成螯合物,形成紫色bca bicinchoninineacidassay化合物,吸收峰在波长此化合物与蛋白浓度的线性关系极强,反应后形cu2+cu+bca成的化合物非常稳定相对于法,操作简单,敏感度高但是与法562nm相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰lowry lowry法这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应,产生的有色化合物吸收峰其最大的特点是,敏感度好,是和两种测试方法的bradford倍;操作更简单,速度更快;只需要一种反应试剂;化合物可以稳定小时,方595nm lowry bca便结果;而且与一系列干扰,反应的还原剂(如,巯基乙醇)相21容但是对于去污剂依然是敏感的最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品lowrybcadtt的结果差异较大,无可比性某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致,感到迷惑,究竟该相信哪种方法由于各种方法反应的基团以及显色基团不一,所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性例如等测试人奶中的蛋白,结果,测出的浓度明显高于,差异显著即使是测定同keller一样品,同一种比色法选择的标准样品不一致,测试后的浓度也不一致如用lowrybcabradford测试细胞匀浆中的蛋白质,以作标准品,浓度,以球蛋白作标准品,浓度因此,在选择比色法之前,最好是参照要测试的样lowry bsa
1.34mg/ml a本的化学构成,寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品另外,比色法定量蛋白
2.64mg/ml质,经常出现的问题是样品的吸光值太低,导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大关键问题是,反应后的颜色是有一定的半衰期,所以每种比色法都列出了反应测试时间,所有的样品(包括标准样品),都必须在此时间内测试时间过长,得到的吸光值变小,换算的浓度值降低除此,反应温度、溶液值等都是影响实验的重要原因此外,非常重要的是,最好是用塑料的比色法避免ph使用石英或者玻璃材质的比色杯,因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色,导致样品吸光值不准确细菌细胞密度()实验室确定细菌生长密度和生长期,多根据经验和目测推断细菌的生长密度在遇od600到要求较高的实验,需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法以未加菌液的培养液作为空白液,之后定量od600培养后的含菌培养液为了保证正确操作,必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数,做出校正曲线实验中偶尔会出现菌液的值出现负值,原因是采用了显色的培养基,即细菌培养一段时间后,与培养基反应,发生变色反应od另外,需要注意的是,测试的样品不能离心,保持细菌悬浮状态分光光度计的重要配件比色杯比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯根据不同的测量体积,有比——色杯和毛细比色杯等一般测试核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不适合比色法测定因为反应中的染料(如考马斯亮兰)能让石英和玻璃着色,所以必须采用一次性的塑料杯而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品由于另外测试的样品量不同,所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量,亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯,样品用量仅需,比色杯单个无菌包装,可以回收样品如塑料比色杯,是目前比色杯市场上一个革新随50μl着生命科学以及相关学科发展,对此类科学的实验研究提出更高的要求,分光光度eppendorfuvette计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器,也成为微生物、食品、制药等相关实验室的必备设备之一范文二紫外分光光度计的使用()预热仪器将选择开关置于,打开电源开关,使仪器预热分钟为了防止光电管疲劳,不要连续光照,预热仪器时和不1“t”测定时应将试样室盖打开,使光路切断20()选定波长根据实验要求,转动波长手轮,调至所需要的单色波长()固定灵敏度档在能使空白溶液很好地调到的情况下,尽可能采用灵敏2度较低的挡,使用时,首先调到挡,灵敏度不够时再逐渐升高但换挡改变灵3“100%”敏度后,须重新校正和选好的灵敏度,实验过程中不要再变动“1”()调节轻轻旋动旋钮,使数字显示为,(此时试样室是打开“0%”“100%”的)4t=0%“0%”“
00.0”()调节将盛蒸馏水(或空白溶液,或纯溶剂)的比色皿放入比色皿座架中的第一格内,并对准光路,把试样室盖子轻轻盖上,调节透过率旋5t=100%钮,使数字显示正好为“100%”“
100.0”()吸光度的测定将选择开关置于,盖上试样室盖子,将空白液置于光路中,调节吸光度调节旋钮,使数字显示为将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿6“a”座架中的其它格内,盖上试样室盖,轻轻拉动试样架拉手,使待测溶液进入光路,“.000”此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值读数后,打开试样室盖,切断光路重复上述测定操作次,读取相应的吸光度值,取平均值()浓度的测定选择开关由旋置,将已标定浓度的样品放入光路,调节浓度1-2旋钮,使得数字显示为标定值,将被测样品放入光路,此时数字显示值即为该待测7“a”“c”溶液的浓度值()关机实验完毕,切断电源,将比色皿取出洗净,并将比色皿座架用软纸擦净8注意事项()为了防止光电管疲劳,不测定时必须将试样室盖打开,使光路切断,以延长
3.光电管的使用寿命1()取拿比色皿时,手指只能捏住比色皿的毛玻璃面,而不能碰比色皿的光学表面2()比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤,也不能用毛刷清洗比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干,不要擦拭,以免损伤它的3光学表面
(二)型紫外光栅分光光度计构造原理752型分光光度计在构造原理上与型分光光度计非常相似,也是由光源室、
1.单色器、试样室、光电管暗盒、电子系统及数字显示器等部件组成光源除了钨卤752722素灯外,还有氢弧灯(或氘灯)波长范围为单色器中的色散元件同型分光光度计一样都是衍射光栅其外部结构与型几乎一样,只200nm~850nm在电源开关的边上多了一个氢灯开关(可参阅附图)型分光光度计能在紫722722外和可见光谱区域内对样品物质作定性和定量分析,应用的范围比型分光光9752度计更广722使用方法()预热仪器将选择开关置于,按下电源开关,钨灯点亮;按下氢灯开
2.关,氢灯电源接通;再按氢灯触发按钮,氢灯点亮仪器预热分钟仪器背1“t”“”“”后有一只钨灯开关,如不需要用钨灯时可将它关闭“”30()选定波长根据实验要求,转动波长手轮,调至所需要的单色波长“”2()固定灵敏度挡首先调到挡,灵敏度不够时再逐渐升高但换挡改变灵敏度后,须重新校正和选好的灵敏度,实验过程中不要再变动3“1”()调节轻轻旋动零旋钮,使数字显示为,(此时试样室是打开“0%”“100%”的)4t=0%“
00.0”()调节将盛蒸馏水(或空白溶液,或纯溶剂)的比色皿放入比色皿座架中的第一格内(波长在以上时,可以用玻璃比色皿波长在以5t=100%下时,需用石英比色皿),并对准光路,把试样室盖子轻轻盖上,调节透过率360nm360nm旋钮,使数字显示正好为如果显示不到,则可适当增加灵敏度的档数,再重新调节点与“100%”“
100.0”
100.0()吸光度的测定将选择开关置于,盖上试样室盖子,将空白液置于光路中,“0%”“100%”调节吸光度调节旋钮,6“a”使数字显示为将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内,盖上试样室盖,轻轻拉动试样架拉手,使待测溶液进入光路,此时数字显示值即为该“.000”待测溶液的吸光度值读数后,打开试样室盖,切断光路()关机实验完毕,切断电源,将比色皿取出洗净,并将比色皿座架用软纸擦净7范文三紫外/可见光分光光度计的使用生物学教学21年(7第902第3卷)期27紫外/见光分光光度计的使用可仉晓文王丽刘慧王珂可王林嵩(南范学命学院新乡40)河师大生科学5037生物学是一个以实验为基础的学科实验教学是生物学教学的重要内容和环节随着科学技术的发以电流表显示,现已逐渐用数显或计算机等所替代,从而减少读数误差2分光光度计的使用展,生物学研究也从定性研究向定量研究过渡在众多定量测定分析技术中,光光度法的应用最为普遍分在了解基本原理的基础上,光光度计的使用主分要从以下几个方面着手源和波长的选择1光根据所测定的物质的性质,选择合适的光源和波长一般在可见光范围选择因此,为教学仪器,作紫外/见分光光度计也从大学可课堂走向中学课堂如何更好地使用分光光度计,有效提高教学效果,培养学生的创新思维和动手能力,是教师必须面对的问题之一1分光光度计原理钨灯,紫外选择氢灯,现在也有的紫外/但可见分光光度计在设计上已取消光源选择,只要一打开机器,种两光源都打开初学者常犯的错误是忽视波长的选择,教学中常遇到的事情是学生把样品测完了才发现波长在有关分光光度法的教学实验中,学环节从介教绍分光光度计原理人手,能起到举一反三的效果但应注意的是在教学中不应过多介绍BeLmeterabr光吸收定律及推导公式,点在于分光光度计的组成和重—选错了,究其原因是没有检查波长设置因此,在教学中,们经常强调使用分光光度计时,一步是打开电我第源,二步就是检查波长如果是继续别人后使用仪第器,第一步就是检查波长则应用尤其是对物理、化学基础较差的学生,过多的公式推导容易让学生产生深奥感而排斥学习各种型号的紫外/可见光分光光度计,不论何种形式,基本上都由五部分组成源、光单色器、品、样接受检测放大系统、显示或记录器前三部分构成光学系统,后两部分构成电学系统两个系统的组合把物质的光吸收变化转变成电流变化,从而定量分析物质的含量源分为可见光源和紫外光源前者常用1光钨灯,适用波长范围是4070m;06n后者常用氘灯,适用波长范围是15~0n940m—品测定2样用于分光光度计测定样品物质含量的基本原理是,品在一定波长下光吸收值的大小样与样品中该物质浓度成正比而最好的线性关系是在光吸收值为03~07时因此,测定前要经过预实验确定合适的样品浓度,让反应后的待测溶液的光吸收值..位于这个范围内否则,测数据不能正确反映实待际变化学生常有的一个误区是光吸收超过10以上色器是分光光度计的心脏部分,的作2单它用是把来自光源的混合光分解为单色.光,能通过调并节波长选择所需入射光路中单色光的波长单色器中时,将待测液稀释后测定实验数据表明,这种做法是不正确的,品稀释应该在反应前而不应在反应后样如果不同样品之间浓度差异较大,在测定时应则先测定低浓度(浅色)再定测高浓度(,深色)这样可,核心元件色散元件也已从棱镜向光栅等更精密的元件过渡波长的选择和单色光质量是分光光度法测量精确度的关键——3样品室一以避免反复洗比色杯不仅节省时间,可以避免洗还杯后润洗所造成的误差为了减少比色杯的光吸收误差,了测定前校正比色杯外,以在测定中平行样品除可是放置待测样品的位置待测样品间使用同一个比色杯测定当分光光度计使用时,每次测定样品时应先用对照校正零点(机器和光吸收)然后再将待测样品拉人,光路进行测定实际操作时也可以只校正光吸收零般盛在吸收池内(比色杯)比色杯有普通光学即玻璃和石英玻璃杯两种前者由于吸收紫外光,只能用于可见光波长测定,用波长范围是40~20r适000mi后者可透过紫外光、可见光和红外光,适用波长范围是1030m800n点,当光吸收零点出现较大误差时,全部校正因为再分光光度法是以物质光吸收—作为设计基础的,一般测定时常以蒸馏水等作为参照调正仪器的零点和光吸收受检测放大系统4接是接收透过比色杯的光强,以电信号显示出来,并主要元件是光电转换设备常用的检测器已从最初的光电管、电信增管、电二光光的零点测定样品得到的光吸收值减去空白管光吸收值,去计算含量但实际上,再比较以空白管代替蒸馏水管来调仪器的零点和光吸收零点,测得的光吸收所值和一般操作所测定的光吸收值是一样的但这样做极管等转换为电荷耦合器件(C等,而有更强的CD)从光电转换效果示装置是将光吸收值显示出来,期是5显早的结果不仅简便了实验操作,而且消除了试剂本身的28生物学教学21年(7第902第3卷)期推理实验在高中生物学教学中的应用伊正学(海西市族中8o)青省宁回学1ooo推理法是在实验基础上经过概括、抽象、理得推出规律的一种研究问题的方法,出的某些规律需要得进一步验证,而某些规律不用或不能用实验直接验证推理法在物理学、数学领域得到了充分的应用生物学的理论建立和技能的应用绝大部分是通过实验完成的,但是,仔细审查生物学每个知识点,都离不开推理高中生物学新课程教学中,需要通过推理来完成教学、指导学生完成学业的知识点明显多了,推理实验教学就成了必不可少的内容1推理实验在高中生物学新课程中的体现和在教学中的应用对学生进行训练这些内容可以让学生体会、悟其领中蕴含的方法,目的就是要引导学生体验科学的过其程和方法,中生物学教学的重要任务之一教学中高用好假说一演绎法,于培养学生大胆想象的创新能对力、密的逻辑推理能力都有很好的作用严孟德尔的豌豆杂交实验是假说一绎法的典型事演例l纪中期,德尔用豌豆做了大量的杂交实9世孟验,在对实验结果进行观察、记载和进行数学统计分析的过程中,发现杂种后代中出现一定比例的性状分离,两对及两对以上相对性状杂交实验中子二代出现不同性状自由组合现象通过严谨的推理提出假说,并对I1假说一演绎法假说一演绎法是高中生物学有.性状分离现象和不同性状自由组合现象作出尝试性解释,然后巧妙地设计了测交实验用以检验假说在完成这一科学推理和实验检验的过程中,关键的部分最自然是推理实验的结论和实验的预测,实际上,交实测验不可能直接验证假说本身,而是验证由假说演绎出的推论,即如果遗传因子决定生物性状的假说是成立的,那么,根据假说可以对测交实验结果进行理论推导关遗传知识学习过程中多次使用的方法,它是在观察和分析基础上提出问题以后,过推理提出解释问题通的假说,根据假说进行演绎,再通过实验检验演绎推理的结论如果实验结果与预期结论相符,就证明假说是正确的反之,则说明假说是错误的这是现代科学研究中常用的一种科学方法高中生物学教材中涉及假说一演绎方法的内容很多,总结人类对遗传物质的探索过程、如分析孟德尔遗和预测然后,实验获得的数据与理论推导值进行将比较,如果二者一致,明假说是正确的;证如果不一致,则证明假说是错误的DA分子半保留复制方式的提出与证实是假说N演绎法的另一典型事例沃森和克里克提出遗传物传实验的科学方法、NDA分子半保留复制方式的提出与证实、中心法则的提出与证实、遗传密码的破译等内容,同时设计了根据你对影响酵母菌种群数量增长的一“因素作出的推测,设计实验进行验证等类似的练习题-|址”质自我复制的假说,98年科学家以大肠杆菌为实验15.“.光吸收值品已倒掉的尴尬擦拭比色杯时应用擦镜纸或绸布擦,不可用硬纸或布擦拭透光面用擦镜纸擦拭时,可3比色杯的使用如前所述,测定范围在可见光时选用普通玻璃比色杯,石英比色杯则在紫外/可见将大张纸剪成小张,每次用指肚顶着擦镜纸,轻单向轻擦拭杯子光范围使用,由于石英比色杯价格较贵,以测可见光所时尽量选用普通玻璃比色杯拿比色杯时手指不能触摸透光面,放入样品室时应让光路穿过透光面,比色杯然后,再换纸的另一点再单向擦,不能来回擦,也不能用一点反复擦,简洁表达为点单面即擦镜单,纸的每一点只能用一次,可以折叠也可以换面(活中生擦眼镜也应是同样道理和方法)学生在实验中往往记住了向忽略了点为了加深印“”象,师应单,单,教给学生做示范如何擦拭比色杯比色杯用后应及时清“”“”洗,般先用自来水洗,一然后用蒸馏水清洗,晾干备用;油污或蛋白液污染较重时,可用1%洗洁精浸泡;色素残留较多时应用相应溶剂清洗,如考马斯亮蓝测蛋白内的样品液应达到比色杯体积的2/3高度,过高容易溢出损坏样品室,过低不能覆盖光路,影响测量数据精确性倾倒测定后样品时,应先将样品倒回试管,并继续保持比色杯口朝下状态,然后将比色杯口扣到粗滤纸上,动23次,移至滤纸上没有液体痕迹为止这样可以将残留液体吸到粗滤纸上,当再次盛下个待测样品时,一方面杯子内无残留液;另一方面杯子外也不会有—液体残留既避免了擦拭杯子,又节省了测定时间和擦镜纸倒回试管的样品,测定结束后确认数在据无误时,再倒掉,这样可以避免发现数据有误时,样含量后,子残留较多蓝色染液,时用酒精清洗即杯此可;必要时可用洗液短时间浸泡,可加热烘烤,可不不用超声波清洗器清洗范文四紫外分光光度计使用经验总结紫外分光光度计使用经验总结
一、分光光度使用经验点滴坚持标准溶液现用现配,不使用过期标准液使用仪器之前,一般要校正仪器,看看空白时透光率是否是
1.比色皿应该保持清洁,干燥如有污物,可用稀盐酸清洗后,再用的无水100%酒精与乙醚清洗凉干禁止用硬物碰或擦透明表面或者建议使用的盐酸溶
2.11液浸泡,然后用无水乙醇冲洗次比色皿具有方向性,使用时要注意,仔细10%2~3观察比色皿上方应该有一个箭头标志的,代表入射光方向注入和倒出溶液时,应该选择非透光面最好使用配对的比色皿防止仪器振动,影响光学系统在开机状态,不测量时,应该打开样品池门,否则,影响光电传感器寿命
3.样品集中测量,避免开机次数,可延长光源寿命
4.仪器工作稳定性差,漂移大时,应该考虑更换光源或光电元件
5.一般分光仪主要有光源部分、光路部分、检测器三的部分,光路有的情况是稳压
6.电源问题,钨灯问题及钨灯位置与光路不一致等问题光路部分主要有比色皿不干
7.净,灯光与比色皿位置不合适(在正常情况下,比色皿位置放一张白纸,可以清楚看到光斑形状呈显矩形,属于正常情况对于检测器大多数是正常的,但是光敏管或者光电管有时侯也会出现问题若峰出现很多毛刺,可能是扫描速度过快,浓度过高或者狭缝过小;紫外分光光度计用来测紫外光时,石英皿用来调零时不稳定,是由那些原因首
8.“”先确定是否用成玻璃比色皿,判断方法在紫外区任一波长下用空气调零测比色皿的
9.吸光度如果超过则比色皿用错再次用空气调零看零点是否稳定,如不稳则是仪器问题,如空气稳定而放入石英皿后不稳定,则检查是否空白溶液吸光度太高,1abs.是否空白溶液药品过期,或者空白溶液透明范围不适合此波长测量比如甲醇在以下吸光度很大无法调零仪器狭缝宽度的选择狭缝的宽度会直接影响到测定的灵敏度和校准曲线的线性210nm范围狭缝宽度过大时,入射光的单色光降低,校准曲线偏离比耳定律,灵敏度降
10.低;狭缝宽度过窄时,光强变弱,势必要提高仪器的增益,随之而来的是仪器噪声增大,于测量不利选择狭缝宽度的方法是测量吸光度随狭缝宽度的变化狭缝的宽度在一个范围内,吸光度是不变的,当狭缝宽度大到某一程度时,吸光度开始减小因此,在不减小吸光度时的最大狭缝宽度,即是所欲选取的合适的狭缝宽度紫外测量吸光度值不准,什么原因,请指教()仪器调零后跳动大的话那可能是仪器有问题
11.()调零稳定的话,看样品浓度是否过高,最好控制在个吸光度之间
1..()浓度合适的话,看是否比色皿没擦干净,一般可用蒸馏水冲洗一下,擦干后
2.0-
1.用镜头纸擦干净
3.()检查样品是否稳定,如果零点不变而放上样品变化,那么是样品有变化,检.查样品是否有问题
4..关于仪器维护()仪器工作电源一般为,允许的电压波动
12.()为了延长光源使用寿命,在不使时不要开光源灯
1.220v10%.()单色器是仪器的核心部分,装在密封盒内不能拆开,为防止色散元件受潮发
2..霉,必须经常更换蛋色器盒干燥剂
3.()必须正确使用吸收池,保护吸收池光学面.()光电转换元件不能长时间暴光,应避免强光照射或受潮积尘
4..
二、固体样品的测定
5..固体分为透明的和不透明的,用仪器测都可以测,但形状有一定要求,根据各个厂家不同,都有其要求,主要是固定问题,均需要配合附件使用透明固体采用固体样品池架附件,可方便固定在样品室内不透明固体又分为两种,、面光滑固体,需用镜面反色附件(利用物体镜面反色原理);
1、表面不光滑固体采用积分球附件可完成仪器对其进行的测量(利用物体慢反色原理)2
三、关于比色皿的使用比色皿怎么清洗
一、市场面上一般使用的石英比色皿均为石英粉烧接的,专用超声波清洗,洗比色皿清洗时毛面朝下
二、石英比色皿清洁方法用乙醚和无水乙醇的混合液(各)清洗若太脏可用专用洗液清洗但时间要短(分钟),再用清水清洗干净
1.50%
三、不要用洗洁精之类的清洁剂以免影响测量
2.10注高级分光光度计都采用专利技术加工的石英比色皿,采用石英本体材料经过高温熔融胶合,减少污染,使用寿命更长(价格是普通石英比色皿二倍)比色皿注意事项.比色皿一般为长方体,其底及两侧为磨毛玻璃,另两面为光学玻璃制成的透光面采用熔融一体、玻璃粉高温烧结和胶粘合而成所以使用时应注意以下几点、拿取比色皿时,只能用手指接触两侧的毛玻璃,避免接触光学面同时注意轻拿轻放,防止外力对比色皿的影响,产生应力后破损
1、凡含有腐蚀玻璃的物质的溶液,不得长期盛放在比色皿中、不能将比色皿放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘烤
2、当发现比色皿里面被污染后,应用无水乙醇清洗,及时擦拭干净3;、不得将比色皿的透光面与硬物或脏物接触盛装溶液时,高度为比色皿的4处即可,光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附,然后再用镜头纸或丝绸擦拭52/3比色皿成组性测试在测量时如对比色皿有怀疑,可自行检测,方法如下、用户可将波长选择置实际使用的波长上,将一套比色皿都注入蒸馏水,将其中一只的透射比调至处,测量其他各只的透射比,凡透射比之差不大于1,即可配套使用100%、比色前将各个比色皿中装入蒸馏水,在比色波长下进行比较,误差在吸
0.5%光度以内的比色皿选出个进行比色测定,可避免因比色皿差异造成测量误差2±
0.001比色皿的洗涤方法4-8随着光谱分析仪器的迅速发展,微量、半微量、荧光等一些比色皿不断出现,对使用维护、清洗比色皿有更高的要求一般在国外都是一次性使用,在国内为了节约成本,开源节流而重复使用如何对比色皿进行清洗,只能按照各种试剂,采用能溶解中和的方法来进行清洗,原则上一是不能损坏比色皿的结构和透光性能;二是能够采用中和溶解的方法来达到比色皿干净如初的效果而分光光度计中比色皿洁净与否是影响测定准确度的因素之一因此,必须重视选择正确的洗净方法下面介绍几种清洗方式、比如测定溶液是酸,如果不干净,就用弱碱溶液洗,要是测定溶液是碱,如果不干净,就用弱酸溶液洗,要是测定溶液是有机物质,如果不干净,就用有机溶1剂,比如酒精等溶液洗、选择比色皿洗涤液的原则是去污效果好,不损坏比色皿,同时又不影响测定、分析常用的铬酸洗液不宜用于洗涤比色皿,这是因为带水的比色皿在该洗液中2有时会局部发热,致使比色皿胶接面裂开而损坏同时经洗液洗涤后的比色皿还很3可能残存微量铬,其在紫外区有吸收,因此会影响铬及其他有关元素的测定一般主张使用硝酸和过氧化氢()的混合溶液泡洗,然后用水冲洗干净
51、对一般方法难以洗净的比色皿,还可以采取以下两种方法、先将比色皿侵入含有少量阴离子表面活性剂的碳酸钠(克升)溶液泡洗,4经水冲洗后,再于过氧化氢和硝酸()混合溶液中侵泡半小时a20/、在通风橱中用盐酸、水和甲醇()混合溶液泡洗,一般不超过分51钟b
13410、比色皿不可用碱液洗涤,也不能用硬布、毛刷刷洗分光光度计及使用维护中的注意事项c
一、分光光度计及其分类利用分光光度法或技术工作的仪器叫分光光度计,可分为如下几类
一、分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响)波长准确度分光光度法原理要求照射在样品池上的单色光必须对应于样品吸收光谱中的某一个1吸收峰的波长由于仪器的制造和调整误差,单色光的实际波长与仪器的波长读数值间都存在一定的误差样品中绝大部分的主要吸收峰都有一定的宽度,对波长准确度要求允许宽些但是,当吸收峰宽度较小,而且吸收峰两侧边缘比较陡直,此时波长准确度的影响就必须引起注意)透射比(吸光度)准确度很显然,透射比或吸光度的误差越大,测试结果的可信性越差,从而影响到测试数2据的准确性)杂散光.杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机械零件表面的漫反射形成的杂散光3是分析样品的非吸收光,随着样品浓度的增加,杂散光的影响也随之增大,将给分析结果带来一定的误差在紫外的短波区域光源强度和检测器的灵敏度均明显减弱,杂散光的影响更不能忽视因此,杂散光的大小也是仪器性能的一项重要指标
二、与分光光度计正确使用和维护有关的几个注意事项(在使用仪器前,必须仔细阅读其使用说明书))若大幅度改变测试波长,需稍等片刻,等灯热平衡后,重新校正和点然后再测量1“0”“100%”)指针式仪器在未接通电源时,电表的指针必须位于零刻度上若不是这种情况,需进行机械调零2)比色皿使用完毕后,请立即用蒸馏水冲洗干净,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率3)操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯,以免影响光效率)、型等分光光度计,由于其光电接收装置为光电倍增管,它本4身的特点是放大倍数大,因而可以用于检测微弱光电信号,5wfz800-da756而不能用来检测强光否则容易产生信号漂移,灵敏度下降针对其上述特点,在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下,因此在预热时,应打开比色皿盖或使用挡光杆,避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳)放大器灵敏度换挡后,必须重新调零)比色杯的配套性问题比色杯必须配套使用,否则将使测试结果失去意义在6进行每次测试前均应进行比较具体方法如下;分别向被测的两只杯子里注入同样7的溶液,把仪器置于某一波长处,石英比色杯;、装蒸馏水,玻璃比色杯处装蒸馏水,将某一个池的透射比值调至,测量其他各池220nm700nm的透射比值,记录其示值之差及通光方向,如透射比之差在的范围内则可以700nm100%配套使用,若超出此范围应考虑其对测试结果的影响±
0.5%
四、分光光度计操作中容易出现的几个典型故障及其排除方法)仪器不能调零可能原因)光门不能完全关闭解决方法修复光门部件,使其完全关闭)透过率1旋到底了解决方法重新调整旋钮)仪器严重受潮解决方ab法可打开光电管暗盒,用电吹风吹上一会儿使其干燥,并更换干燥剂)电路“100%”“100%”c故障解决方法送修理部门,检修电路d)仪器不能调可能原因)光能量不够解决方法增加灵敏度倍率档位,或更换光源灯(尽管灯还2“100%”亮)a)比色皿架未落位解决方法调整比色皿架使其落位)光电转换部分老化解决方法更换部件b c)电路故障解决方法调修电路)测量过程中,点经常变动可能原因d)比色皿在比色皿架中放置的位置不一致,或其表面有液滴解决方法用擦镜3“100%”纸擦干净比色皿表面,然后将其安放在比色槽的左边,上面用定位夹定位a)电路故障(电压、光电接收、放大电路)解决方法送修)数显不稳可能原因b4)预热时间不够解决方法延长预热时间至分钟左右(部分仪器由于老化等原因,长时间处于工作状态时,也会工作不稳))光电管内的干燥剂失效,a30使微电流放大器受潮解决方法烘烤电路,并更换或烘烤干燥剂b)环境振动过大、光源附近空气流速大、外界强光照射等解决方法改善工作环境c)光电管、电路等其它原因解决方法送修
五、提高分光光度计透射比检定及使用精度的几种方法d在分光光度计的使用或检定中,透射比(吸光度)的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标,它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性所以提高此项指标的使用及检定准确度显得尤为重要下面结合近年来对分光光。